[发明专利]慢病毒包装载体系统、慢病毒及其构建方法、试剂盒

说明书

本发明涉及一种慢病毒包装载体系统、慢病毒及其构建方法、试剂盒。该慢病毒包装载体系统包含2个或更多个质粒，能产生只有一次感染能力而无复制能力的慢病毒，其中一个质粒包含顺次连接的启动子、增强子、以及用于编码包膜蛋白的核酸片段，编码包膜蛋白的核酸片段包括用于表达SARS‑CoV‑2的S蛋白的核酸片段或用于表达SARS‑CoV‑2的S蛋白的突变体的核酸片段，用于表达SARS‑CoV‑2的S蛋白的突变体为SARS‑CoV‑2的S蛋白的S1亚基的C端第614位氨基酸由天冬氨酸突变为甘氨酸。利用上述慢病毒包装载体系统制得的慢病毒可以用于筛选针对SARS‑CoV‑2或其突变株的药物，安全性高。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种慢病毒包装载体系统、慢病毒及其构建方法、试剂盒。

背景技术

严重急性呼吸道综合征冠状病毒2(Severe acute respiratory syndromecoronavirus 2，SARS-CoV-2)是继SARS-CoV和MERS-CoV之后发现的一种对人类具有高致病性的新型β冠状病毒，为非节段单股正链RNA包膜病毒。

然而，由于SARS-CoV-2是一种生物安全三级(BSL-3)的烈性传染病的病原体，SARS-CoV-2的分离与培养必须在具有BSL-3的条件下进行，这限制了针对SARS-CoV-2的药物的研发效率。

发明内容

基于此，有必要提供一种慢病毒包装载体系统，利用该慢病毒包装载体系统构建的慢病毒包膜蛋白为SARS-CoV-2的S蛋白，用该慢病毒研发治疗SARS-CoV-2的药物时，不必在BSL-3的条件下进行。

一种慢病毒包装载体系统，其包含2个或更多个质粒，能产生只有一次感染能力而无复制能力的慢病毒，其中一个质粒包含顺次连接的启动子、增强子、以及用于编码包膜蛋白的核酸片段，所述用于编码包膜蛋白的核酸片段包括用于表达SARS-CoV-2的S蛋白的核酸片段或用于表达SARS-CoV-2的S蛋白的突变体的核酸片段，所述用于表达SARS-CoV-2的S蛋白的突变体为SARS-CoV-2的S蛋白的S1亚基的C端第614位氨基酸由天冬氨酸突变为甘氨酸；所述SARS-CoV-2的S蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No：1所示，所述SARS-CoV-2的S蛋白的突变体的氨基酸序列如SEQ ID No：2所示；所述增强子为β-珠蛋白的内含子。

上述慢病毒包装载体系统利用SARS-CoV-2的S蛋白代替传统的VSV-G蛋白来包装慢病毒，制得的慢病毒是S蛋白包膜的慢病毒，S蛋白包膜化的慢病毒大大降低了研究SARS-CoV-2对实验操作环境的要求，可以实现在BSL-2的条件下模拟野生型SARS-CoV-2病毒或其突变株的一系列生物过程，可以加快筛选抗SARS-CoV-2感染的治疗性抗体和相关疫苗的研发。

在其中一个实施例中，所述慢病毒包装载体系统为四质粒系统，包括包膜蛋白表达质粒、慢病毒包装表达质粒、gag-pol表达质粒及rev表达质粒。在其中一个实施例中，所述用于表达SARS-CoV-2的S蛋白的核酸片段的核苷酸序列如SEQIDNo：3所示，所述用于表达SARS-CoV-2的S蛋白的突变体的核酸片段的核苷酸序列如SEQIDNo：4所示。在其中一个实施例中，所述启动子为巨细胞病毒启动子或CAG启动子。在其中一个实施例中，所述增强子的核苷酸序列如SEQIDNo：5所示。

一种慢病毒的构建方法，包括以下步骤：使用上述的慢病毒包装载体系统转染宿主细胞，制备慢病毒。

在其中一个实施例中，所述慢病毒包装载体系统包括包膜蛋白表达质粒、慢病毒包装表达质粒、gag-pol表达质粒及rev表达质粒，所述包膜蛋白表达质粒、所述慢病毒包装表达质粒、所述gag-pol表达质粒及所述rev表达质粒的用量比为(3μg～10μg)：10μg：(3μg～10μg)：(3μg～10μg)。

一种慢病毒，由上述的慢病毒的构建方法制得。