[发明专利]松鼠葡萄球菌CY1-78及其在发酵制备溶纤酶中的应用

权利要求书

1.一种松鼠葡萄球菌(Staphylococcus sciuri)CY1-78菌株，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号：GDMCC No:61273，保藏日期2020年11月5日，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，邮编：510075。

2.一种权利要求1所述松鼠葡萄球菌CY1-78在发酵制备溶纤酶中的应用。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述的应用是将松鼠葡萄球菌CY1-78菌株接种入产酶培养基，于30–35℃、200–250r/min发酵24–32h，得发酵液，发酵液经过离心后去除菌体，得到溶纤酶粗酶液，再经过盐析、透析和冷冻干燥后，获得溶纤酶冻干粉；所述产酶培养基终浓度组成为：蛋白胨10–20g/L，麦芽浸粉5–10g/L，酵母浸出粉5–10g/L，NaCl 10g/L，MgSO₄·7H₂O 1g/L，溶剂为水，初始pH为7.2–7.4。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述松鼠葡萄球菌CY1-78菌株在产酶培养前，先经活化培养，再经种子培养，将种子液以体积浓度2％–3％的接种量接入产酶培养基，所述斜面活化培养和种子培养方法为：

(1)活化培养：将松鼠葡萄球菌CY1-78菌株接种于LB斜面培养基，于37℃培养24–36h，得到活化后的斜面菌体；所述的LB斜面培养基终浓度组成为：蛋白胨10g/L，酵母浸出粉5g/L，NaCl 10g/L，琼脂20g/L，溶剂为水，初始pH为7.2–7.4；

(2)种子培养：接种环挑取步骤(1)活化后的斜面菌体2–3环，接种至LB液体培养基中，于35℃、200–250r/min振荡条件下培养20–24h，得到种子液；所述LB液体培养基终浓度组成为：蛋白胨10g/L，酵母浸出粉5g/L，NaCl 10g/L，溶剂为水，初始pH为7.2–7.4。

5.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述的产酶培养基组成为：蛋白胨20g/L，麦芽浸粉10g/L，酵母浸出粉10g/L，NaCl 10g/L，MgSO₄·7H₂O 1g/L，溶剂为水，初始pH为7.2。

6.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述溶纤酶冻干粉按如下步骤制备：

(1)将发酵液于4℃、5000r/min离心10min，分离除去菌体，得澄清的溶纤酶粗酶液；

(2)往溶纤酶粗酶液中加入硫酸铵，使其饱和度达到30％–35％，4℃沉淀12–24h，之后于4℃、8000r/min条件下离心10min，去除沉淀，保留上清液；

(3)往步骤(2)所得的上清液中再次加入硫酸铵，使其饱和度达到65％–70％，4℃沉淀12–24h，之后于4℃、8000r/min条件下离心10min，弃去上清液，沉淀物用原溶纤酶粗酶液体积4％–5％的50mmol/L、pH 8.0Tris-HCl缓冲液溶解，得到溶纤酶浓缩液；

(4)将步骤(3)所得溶纤酶浓缩液装入截留分子量为14kDa的透析袋中，以去离子水为透析液透析除盐后，取截留液于–40℃、真空度≤30Pa条件下冷冻干燥，得到溶纤酶冻干粉。