[发明专利]松鼠葡萄球菌CY1-78及其在发酵制备溶纤酶中的应用

说明书

本发明公开了一种松鼠葡萄球菌CY1‑78及其在发酵制备溶纤酶中的应用，将松鼠葡萄球菌(Staphylococcus sciuri)CY1‑78菌株接种入产酶培养基，于30–35℃、200–250r/min发酵24–32h，得发酵液，发酵液经过离心后去除菌体，得到溶纤酶粗酶液，再经过盐析、透析和冷冻干燥后，得到溶纤酶冻干粉；本发明提供的产溶纤酶的松鼠葡萄球菌CY1‑78菌株，生长快、易培养，发酵周期短；松鼠葡萄球菌CY1‑78菌株产溶纤酶活性高，在优选的条件下，摇瓶发酵的酶活可达1553U/mL；溶纤酶的分离纯化工艺简单，经盐析和透析脱盐后，溶纤酶的冻干粉活力达到4030U/mg。

(一)技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一株松鼠葡萄球菌(Staphylococcussciuri)及其在发酵制备溶纤酶中的应用。

(二)背景技术

血栓性疾病严重危害人类的健康，其特征是血液中有形成分在血管内形成血栓，造成血管部分或完全堵塞，从而引起相应组织或器官缺氧、缺血及坏死。常见的血栓性疾病主要包括心肌梗塞、心绞痛、脑血栓中风、肺梗塞等。血栓性疾病不仅死亡率高且致残率高，发病率远高于癌症。随着人们饮食习惯的改变和寿命的延长，血栓性疾病的发病率也正在逐年提高。据世界卫生组织统计，世界每年约2600万人死于心脑血栓疾病，血栓性疾病已成为全球人口死亡第一病因。

治疗血栓性疾病的药物有溶栓药物、抗血小板药物和抗凝剂，最为有效且可靠的方法是溶栓药物治疗，目前使用的溶栓药物主要是溶纤酶类。溶纤酶是能够水解血液中纤维蛋白一类蛋白酶的总称，包括组织溶酶原激活剂、链激酶、尿激酶、蚓激酶和纳豆激酶等。目前临床上使用溶纤酶药物均存在一些不足，如易导致出血、半衰期短、口服无效、价格高等。因此仍需寻找半衰期长、无毒副作用、适用口服、成本低的新来源溶纤酶。

动物、植物和微生物都可以产生溶纤酶，如来自蚯蚓的蚓激酶、来自中药蒲黄的溶纤酶；来自溶血性链球菌的链激酶，来自纳豆枯草杆菌的纳豆激酶。相比之下，微生物因其种类多、产酶活性高、生长快、生产成本低，是溶纤酶最佳来源。

家蚕的蚕蛾出茧时，口腔吐出含有溶茧酶的弱碱性液体，水解粘着茧丝的丝胶及部分丝素，使蚕茧结构变为疏松，然后用胸足拨开已松解的茧丝，形成一个孔，再从孔中钻出。溶茧酶成分来源于蚕蛾的下腭和中肠，不同来源的酶协同作用水解茧层。来自下腭的溶茧酶成分由蚕蛾自己分泌，而来自中肠的溶茧酶可能由肠道中的微生物产生。蚕蛹在羽化过程中，肠道微生物生长非常旺盛，产生大量的蛋白酶，这些蛋白酶不仅具有水解丝胶丝素的活性，而且可能还具有其他蛋白的活性，如溶纤酶活性。

为了获得活力高、生产成本低、溶纤专一性强的溶纤酶，本发明从羽化前的蚕蛹肠道中分离产溶纤酶的微生物，经过诱变和筛选，优化产酶发酵工艺，开发一种新的微生物来源的溶纤酶及其生产工艺。

(三)发明内容

本发明提供一株新的溶纤酶产生菌—松鼠葡萄球菌(Staphylococcus sciuri)CY1-78菌株，及其在制备溶纤酶中的应用，利用该菌株发酵制备溶纤酶，具有发酵酶活单位高、周期短、分离纯化工艺简单的特点，制备的溶纤酶具有成本低、活性高的优点。

本发明采用的技术方案为：

本发明提供一株新的溶纤酶产生菌—松鼠葡萄球菌(Staphylococcus sciuri)CY1-78菌株，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号：GDMCC No:61273，保藏日期2020年11月5日，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，邮编：510075。

本发明所述松鼠葡萄球菌CY1-78菌株是从羽化前的家蚕蚕蛹肠道中分离，并经过紫外线诱变，从突变株中筛选获得。所述松鼠葡萄球菌CY1-78菌株的培养特征如下：该菌株接种于LB平板培养基上，37℃下培养24h后，可见乳白色菌落，菌落不透明，边缘整齐，表面光滑(菌落照片见附图1)。将所述松鼠葡萄球菌CY1-78菌株接种在脱脂牛奶平板培养基上，37℃培养24h后，在菌落周围形成较大的透明圈(菌落照片见附图2)。