[发明专利]一种肝靶向的过氧亚硝酸根荧光探针及制备方法和应用

说明书

本申请公开了一种肝靶向的过氧亚硝酸根荧光探针及制备方法和应用，属于化学生物材料技术领域。针对大多数的探针缺乏组织或器官靶向性，导致无法深入研究ONOO^‑与某一特定疾病的关系并研究其致病机理的问题。本申请肝靶向的过氧亚硝酸根荧光探针含有肝靶向单元熊去氧胆酸；该荧光探针的制备方法是通过将化合物4‑溴‑1,8‑萘二甲酸酐溶解于二氧六环中，加入正丙胺，反应液浓缩，柱层析分离得化合物NA‑1；然后溶解在2‑甲氧基乙醇中，加入水合肼和碳酸氢钠，柱层析分离得化合物NA‑2；然后再与熊去氧胆酸溶解在N,N‑二甲基甲酰胺中，再加入1‑羟基苯并三氮唑，1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐，N,N‑二异丙基乙胺，粗品经柱层析得到目标化合物NA‑3。

技术领域

本发明属于化学生物材料技术领域，具体涉及一种肝靶向的过氧亚硝酸根荧光探针及制备方法和应用。

背景技术

过氧亚硝酸根(ONOO^-)作为生物体内重要的活性氧分子，参与着生物体内重要的生理和病理过程，主要由一氧化氮(NO)和超氧自由基(O₂^.-)合成。高反应活性的ONOO^-一方面可以与许多生物分子诸如蛋白质、脂质和NDA发生反应，另一方面对细胞产生氧化应激毒性。然而，浓度异常的ONOO^-成为许多疾病的关键致病因素，如神经退行性疾病、缺血-再灌注疾病、炎症和癌症等。因此，建立一种有效的、高选择性的ONOO^-检测技术是非常重要的。

ONOO^-是一种在细胞和组织中易扩散、半衰期很短的分子，很多研究只能通过其代谢产物进行间接推测，这给其中的研究结果带来干扰或不确定性。荧光探针法具有取样量少、灵敏度高、选择性强、操作简便等优点，已经被广泛应用于各种离子及生物活性分子的检测当中。

目前，用于检测ONOO^-的荧光探针已应用到细胞水平或活体动物中。但绝大多数的探针缺乏组织或器官靶向性，导致无法深入研究ONOO^-与某一特定疾病的关系并研究其致病机理。其中肝癌由于其发病前症状不明显，造成患者早期诊断困难，再加之其死亡率较高，称为目前亟需解决的临床问题之一。而ONOO^-作为重要的生物分子其生物体内浓度的变化与肝癌的发生和发展密切相关。因此，研究一种能够靶向检测肝脏中ONOO^-浓度的荧光探针，不仅能够深入研究ONOO^-在肝癌发生发展过程的作用，而且有望为肝癌的早期诊断提供新的方法和技术。

发明内容

针对上述问题本发明提供了一种肝靶向的过氧亚硝酸根荧光探针及制备方法和应用。

为了达到上述目的，本发明采用了下列技术方案：

一种肝靶向的过氧亚硝酸根荧光探针，含有肝靶向单元熊去氧胆酸，化学结构式为：

一种肝靶向的过氧亚硝酸根荧光探针的制备方法，包括以下步骤：

步骤1，化合物4-溴-1,8-萘二甲酸酐溶解于二氧六环中，搅拌至澄清，加入正丙胺，氮气置换，进行第一次反应；将反应液浓缩，经柱层析分离得到化合物NA-1；

步骤2，化合物NA-1溶解在2-甲氧基乙醇中，加入水合肼和碳酸氢钠，进行第二次反应；除去溶剂，加入水，有不溶固体析出，过滤，得到固体混合物，经柱层析分离得到化合物NA-2；

步骤3，化合物NA-2和熊去氧胆酸溶解在N,N-二甲基甲酰胺中，再加入1-羟基苯并三氮唑，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐，N,N-二异丙基乙胺，室温搅拌12h；倒入水中，搅拌过滤，粗品经柱层析得到目标化合物NA-3。

进一步，所述步骤1中4-溴-1,8-萘二甲酸酐与正丙胺的质量比为5:1.12。