[发明专利]一种几丁质强化木霉防控玉米轮枝镰刀菌的评价分析方法

权利要求书

1.一种几丁质强化木霉防控玉米轮枝镰刀菌的评价分析方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）无菌条件下轮枝镰刀菌的样本接种处理；

（2）无菌条件下木霉和轮枝镰刀菌和自然条件下木霉和镰刀菌样本的接种处理；

（3）真菌数量的定量分析；

（4）玉米幼苗的土培；

（5）真菌孢子的接种处理；

（6）土壤酶活测定分析，获得评价分析结果。

2.根据权利要求1所述的一种几丁质强化木霉防控玉米轮枝镰刀菌的评价分析方法，其特征在于，步骤（1）所述的无菌条件下轮枝镰刀菌的样本接种处理包括以下步骤：将土与蛭石体积比为1:1均匀混合，121 ℃，20min灭菌，65 ℃烘箱过夜干燥，干燥完成后加入灭菌处理的去离子水，保持水分含量在60%，分成若干个样本组，其中一个样本组加入2%几丁质，同时加入轮枝镰刀菌的孢子液混匀使浓度为107个/g，25 ℃避光培养，培养7 d。

3.根据权利要求1所述的一种几丁质强化木霉防控玉米轮枝镰刀菌的评价分析方法，其特征在于，步骤（2）中的木霉采用哈茨木霉，采用的木霉培养基包括0.2 g MgSO4·7H2O，0.9 g K2HPO4，1 g NH4NO3，0.15 g KCl，3g葡萄糖，10 mL 1/300孟加拉红，20g琼脂，蒸馏水补足至1000 mL，115 ℃高压灭菌30 min；待培养基冷却至50 ℃，添加25 mL 1%氯霉素，3mL 3%链霉素，0.2 g五氯硝基苯，1 mL 曲拉通，1.2 mL霜霉威，150 ppm潮霉素。

4.根据权利要求1所述的一种几丁质强化木霉防控玉米轮枝镰刀菌的评价分析方法，其特征在于，步骤（2）所述的无菌条件下木霉和轮枝镰刀菌样本的接种处理包括：将土与蛭石体积比为1:1均匀混合，115 ℃，30 min灭菌，65 ℃烘箱过夜干燥，干燥完成后加入灭好菌的去离子水，保持水分含量在60%，分成若干样本组，其中一个样本组加入2%几丁质同时加入哈茨木霉使浓度为107个/g，并在加入哈茨木霉3 d后加入相同浓度的轮枝镰刀菌，25℃避光培养7 d。

5.根据权利要求1所述的一种几丁质强化木霉防控玉米轮枝镰刀菌的评价分析方法，其特征在于，步骤（2）所述的自然条件下木霉和镰刀菌样本的接种处理包括：将土与蛭石体积比为1:1均匀混合，65 ℃烘箱过夜干燥，干燥完成后加入去离子水，保持水分含量在60%，分成若干样本组，其中一个样本组加入2%几丁质，同时加入哈茨木霉，并在加入哈茨木霉107个/g，3 d后加入同样浓度的轮枝镰刀菌，25 ℃避光培养，分别在7 d以及14 d时取样，同时留样保存。

6.根据权利要求1所述的一种几丁质强化木霉防控玉米轮枝镰刀菌的评价分析方法，其特征在于，步骤（3）所述的真菌数量的定量分析包括菌落涂布计数，真菌母液悬浮液的制备包括：称取固体样品10 g，加入带玻璃珠的100 mL的无菌水，静置20 min，在旋转式摇床上200 r/min充分震荡30 min，即成母液悬浮液。

7.根据权利要求1所述的一种几丁质强化木霉防控玉米轮枝镰刀菌的评价分析方法，其特征在于，步骤（3）所述的真菌数量的定量分析包括qPCR定量计数。

8.根据权利要求1所述的一种几丁质强化木霉防控玉米轮枝镰刀菌的评价分析方法，其特征在于，步骤（4）所述玉米幼苗土培的土壤处理包括：将自然土壤与蛭石按照体积比1:1混合均匀，加入水润湿后，保持水分在60%左右，装入1 L的组培瓶中，每瓶350 g，处理组加入2%的几丁质，空白对照组不加入几丁质，施加与几丁质相同质量的自然土壤与蛭石混合物，备用；将蛭石与石英砂按照1:1的体积比混合均匀，加入适量的水润湿后装入1L容量的组培瓶中，每瓶350 g，用高压蒸汽灭菌锅，在121 ℃、20 min条件下灭菌三次，备用。