[发明专利]一种几丁质强化木霉防控玉米轮枝镰刀菌的评价分析方法

说明书

本发明属于植保实验技术领域，具体涉及一种几丁质强化木霉防控玉米轮枝镰刀菌的评价分析方法。其包括无菌条件下轮枝镰刀菌的样本接种处理；无菌条件下木霉和轮枝镰刀菌和自然条件下木霉和镰刀菌样本的接种处理；真菌数量的定量分析；玉米幼苗的土培；真菌孢子的接种处理；土壤酶活测定分析的步骤，为应用几丁质和木霉防控玉米病菌具有指导意义。

技术领域

本发明属于植保实验技术领域，具体涉及一种几丁质强化木霉防控玉米轮 枝镰刀菌的评价分析方法。

背景技术

玉米作为世界范围内主要的经济作物，在玉米上发生的病害主要是由镰刀 菌引起的苗枯病，它能使玉米的根部以及茎部等多处感染，从而造成作物减产 和品质下降。目前，木霉作为土壤习居菌，对改善土壤质地以及促进作物生长 和防治微生物病害具有显著的效果。为实现农业的可持续发展，以木霉为首的 生物菌剂的使用已经得到行业专家的青睐，并且利用木霉拮抗防治病害早在国 内外已有报道同时在一些作物立枯病等病害的防治已经取得了良好的效果。几 丁质(Chitin)是一种聚合多糖，是自然界中广泛存在的生物多聚物，其储存 量非常丰富。几丁质作为自然界中广泛存在的生命第六大元素，能够抑制病原 菌的生长并且能够诱导宿主产生几丁质酶从而分解真菌的细胞壁。早在1962年 就有人研究发现将几丁质添加到土壤中能够促使拮抗菌分解病菌胞壁，1971年 Senh等人发现几丁质添加到土壤中对立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)具有 抑制作用。木霉在不受外界刺激时细胞中存在少量的几丁质酶，有研究报道， 当木霉在拮抗病原菌时，能够产生大量的几丁质酶等一系列水解酶来水解病原 菌的细胞壁。施加外源诱导物几丁质，可以激发木霉产生更多几丁质酶从而水 解病原菌细胞壁，达到抑制病原菌生长的效果。

发明内容

本发明的目的是要提供一种操作简易，分析全面准确，具有很好实用性的 几丁质强化木霉防控玉米轮枝镰刀菌的评价分析方法。

为了解决上述技术问题，本发明采取的技术方案如下：

一种几丁质强化木霉防控玉米轮枝镰刀菌的评价分析方法，其包括以下步 骤：

无菌条件下轮枝镰刀菌的样本接种处理；

无菌条件下木霉和轮枝镰刀菌和自然条件下木霉和镰刀菌样本的接种处理；

真菌数量的定量分析；

玉米幼苗的土培；

真菌孢子的接种处理；

土壤酶活测定分析，获得评价分析结果。

上述的一种几丁质强化木霉防控玉米轮枝镰刀菌的评价分析方法，其步骤 (1)所述的无菌条件下轮枝镰刀菌的样本接种处理包括以下步骤：将土与蛭石 体积比为1:1均匀混合，121℃，20min灭菌，65℃烘箱过夜干燥，干燥完成 后加入灭菌处理的去离子水，保持水分含量在60％，分成若干个样本组，其中一 个样本组加入2％几丁质，同时加入轮枝镰刀菌的孢子液混匀使浓度为107个/g， 25℃避光培养，培养7d。

上述的一种几丁质强化木霉防控玉米轮枝镰刀菌的评价分析方法，其步骤 (2)中的木霉采用哈茨木霉，采用的木霉培养基包括0.2g MgSO4·7H2O，0.9 g K2HPO4，1gNH4NO3，0.15g KCl，3g葡萄糖，10mL 1/300孟加拉红，20g 琼脂，蒸馏水补足至1000mL，115℃高压灭菌30min；待培养基冷却至50℃， 添加25mL 1％氯霉素，3mL 3％链霉素，0.2g五氯硝基苯，1mL曲拉通，1.2 mL霜霉威，150ppm潮霉素。