[发明专利]基于压力变性和蛋白质组定量的药物靶蛋白鉴定方法

权利要求书

1.基于压力变性和蛋白质组定量的药物靶蛋白鉴定方法，其特征在于：

将药物和蛋白质样品于溶液中共孵育，使药物和其靶蛋白结合后；对蛋白质样品溶液施加压力，使样品中的蛋白质部分变性而沉淀，对施加压力后的复杂蛋白质样品进行离心，除去沉淀，收集上清液，得到样品1；

同时使用相同的条件对不添加药物的蛋白质样品进行施加压力和离心处理，收集上清液，得到样品2；

分别对样品1和样品2进行变性、还原和烷基化，酶解成肽段，使用液相色谱-质谱联用技术，使用定量蛋白质组学进行蛋白质的无标记或者标记定量，找到与药物孵育及未孵育蛋白质样品中，在压力下浓度发生变化的蛋白质，即鉴定得到药物的靶蛋白。

2.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：将药物和蛋白质样品于缓冲液中共孵育，使药物和靶蛋白结合，药物浓度范围为10nM-10mM，蛋白质浓度范围为0.01-10.0mg/mL，孵育时间范围为10-2000分钟，孵育温度范围为10-60℃。

3.按照权利要求1或2所述的方法，其特征在于：缓冲溶液可能为磷酸钠缓冲液、醋酸钠缓冲液、碳酸氢铵缓冲液、硼酸钠缓冲液中的一种。

4.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：蛋白质的变性方式是压力变性，压力的范围为1-1000MPa，施加压力的时间为1-1000分钟。

5.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：对压力变性后的蛋白质样品，使用离心的方法去除沉淀的蛋白质，离心速度范围为1000-10000rpm，离心时间范围为5-500分钟。

6.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：对加压变性和离心后的样品1和2，使用液相色谱-质谱联用技术对其进行鉴定，并使用标记或者无标记蛋白质定量方法，对样品1和2中的各种蛋白质进行相对定量。

7.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：对样品1和2中的各种蛋白质，根据其相对定量结果，选择与药物孵育及未与药物孵育蛋白质样品加压变性后含量有差异的蛋白质，作为药物的靶蛋白；显著差异的标准为p值小于一定数值，范围为0.001-0.05。

8.按照权利要求1所述的药物靶蛋白鉴定方法，可用于高通量的鉴定药物的靶蛋白。