[发明专利]一种检测与小麦籽粒POD活性相关的KASP标记的引物组、试剂盒及应用有效
申请号: | 202011356893.5 | 申请日: | 2020-11-27 |
公开(公告)号: | CN112266975B | 公开(公告)日: | 2022-07-26 |
发明(设计)人: | 翟胜男;刘建军;李豪圣;曹新有;刘成;宋健民;刘爱峰;程敦公;赵振东 | 申请(专利权)人: | 山东省农业科学院作物研究所 |
主分类号: | C12Q1/6895 | 分类号: | C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11;A01H1/04 |
代理公司: | 北京方圆嘉禾知识产权代理有限公司 11385 | 代理人: | 任霜 |
地址: | 250000 山东*** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 检测 小麦 籽粒 pod 活性 相关 kasp 标记 引物 试剂盒 应用 | ||
1.一种基于Excalibur_c95720_329-KASP标记的引物组的检测小麦籽粒POD活性的方法,包括以下步骤:以待检测小麦基因组DNA为模板,利用Excalibur_c95720_329-KASP标记的引物组进行PCR扩增,获得扩增产物,对小麦籽粒进行分型;根据分型的结果进行小麦籽粒POD活性的判断,小麦籽粒的POD活性从高到低对应的基因型分别为GG、GA和AA;
所述引物组由引物A、引物B和引物C组成;
所述引物A的核苷酸序列如SEQ ID NO .1所示;
所述引物B的核苷酸序列如SEQ ID NO .2所示;
所述引物C的核苷酸序列如SEQ ID NO .3所示。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,每5μL所述PCR扩增的反应体系包括:模板DNA 2μL,引物工作液0.05μL,KASP 2×Master Mix 2.0μL和余量的水。
3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述引物工作液中引物A的浓度为100μM、引物B的浓度为100μM和引物C的浓度为100μM。
4.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述KASP 2×Master Mix包括荧光探针A、荧光探针B、淬灭探针A、淬灭探针B、Taq酶,dNTP和Mg2+。
5.根据权利要求1~4任一项所述的方法,其特征在于,所述PCR扩增的反应程序为:95℃,15min;95℃,20s、65~57℃,1min,9个循环,每个循环降1 .0℃;95℃,20s、57℃,60s,32个循环。
6.权利要求1~5任一项所述的方法在POD活性遗传改良中的应用,所述Excalibur_c95720_329位于POD-2D基因中第4031位核苷酸。
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