[发明专利]一种检测与小麦籽粒POD活性相关的KASP标记的引物组、试剂盒及应用

说明书

本发明提供了一种检测与小麦籽粒POD活性相关的Excalibur_c95720_329‑KASP标记的引物组、试剂盒及应用，属于分子遗传育种技术领域。本发明提供的检测小麦籽粒POD活性的Excalibur_c95720_329‑KASP标记的引物组，分型效果良好，可用于POD‑2D等位基因快速检测，为利用分子标记辅助育种高效精准改良小麦籽粒POD活性提供分子工具和理论依据。

技术领域

本发明属于分子遗传育种技术领域，具体涉及一种检测与小麦籽粒POD活性相关的Excalibur_c95720_329-KASP标记的引物组、试剂盒及应用。

背景技术

小麦是世界上最重要的粮食作物之一，约35％的人口以其为主食。随着生活水平的提高，品质改良已成为我国小麦育种的重要目标，培育和推广优质小麦是目前农业供给侧改革的重要内容。面粉及面制品色泽是小麦品质评价的重要指标，对面条、馒头等传统食品品质具有重要影响。面筋网络结构决定面团的理化性质和流变学特性，显著影响面粉加工品质。

过氧化物酶(Peroxidase，POD)是一个广泛存在于植物、动物、真菌、细菌和酵母的蛋白大家族。同一植物通常存在几十到上百种POD，参与植物从萌发到凋亡的一系列生长发育过程，如种子萌发、生长素代谢、木质化和栓化、病虫害防御及抗逆性等。

POD存在于小麦籽粒的各个部分，如表皮、种皮、胚和胚乳。小麦籽粒POD活性相对较高，分别是燕麦、水稻和玉米的3、6和7倍。小麦籽粒POD对面粉及其制品色泽具有褐变和漂白的双重作用，且漂白作用大于褐变作用。在面粉加工过程中，POD通过催化面筋蛋白间酪氨酸交联、阿拉伯木聚糖阿魏酸交联或增加蛋白和阿拉伯木聚糖交联，改善面筋网络结构，提高面粉加工品质。POD作为生物类食品添加剂早已被广泛使用，用于漂白面团、提高面筋强度和增加面包体积等。因此，加强小麦籽粒POD活性遗传基础研究，通过遗传改良提高小麦籽粒内源POD活性，替代POD添加剂的使用，是获得理想面制品色泽和加工品质最经济有效、健康安全的途径，具有重要的理论和实践意义。

前人对小麦POD的研究主要集中于病原菌防御及非生物胁迫响应方面，小麦籽粒POD活性遗传基础研究较少，仅有少数影响小麦籽粒POD活性的基因被克隆，制约了小麦品质遗传改良和分子标记辅助育种进程。因此，迫切需要一种利用分子标记辅助育种快速检测小麦籽粒POD活性的方法。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种检测与小麦籽粒POD活性相关的Excalibur_c95720_329-KASP标记的引物组、试剂盒及应用。本发明提供的引物组分型效果良好，可用于POD-2D等位基因快速检测，为利用分子标记辅助育种高效精准改良小麦籽粒POD活性提供分子工具和理论依据。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

本发明提供了一种检测与小麦籽粒POD活性相关的Excalibur_c95720_329-KASP标记的引物组，所述引物组包括引物A、引物B和引物C；

所述引物A的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述引物B的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

所述引物C的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

本发明提供了一种检测与小麦籽粒POD活性相关的Excalibur_c95720_329-KASP标记的试剂盒，所述试剂盒包括上述技术方案中所述引物组、KASP 2×MasterMix和水。

本发明提供了一种基于上述技术方案中所述引物组或上述技术方案中所述试剂盒的检测小麦籽粒POD活性的方法，包括以下步骤：以待检测小麦基因组DNA为模板，利用上述技术方案中所述的引物组进行PCR扩增，获得扩增产物，对小麦籽粒进行分型；根据分型的结果进行小麦籽粒POD活性的判断，小麦籽粒的POD活性从高到低对应的基因型分别为GG、GA和AA。