[发明专利]一种病原菌比色传感检测方法及其应用

说明书

本发明涉及食品安全监测技术领域，具体公开了一种病原菌比色传感检测方法及其应用。本发明的病原菌比色传感检测方法，其通过结合有病原菌的适配体‑PSs‑半胱胺偶合物与AuNPs混合后的颜色变化获得病原菌的检测结果，所述适配体‑PSs‑半胱胺偶合物中的适配体可与待测病原菌结合。并以cDNA‑MNPs偶合物作为捕获探针，用于在所述适配体‑PSs‑半胱胺偶合物与待测样品混合后，捕获未结合待测病原菌的适配体‑PSs‑半胱胺偶合物。该方法可简单、快速、高灵敏、现场的检测待测样品中的病原菌含量。

技术领域

本发明涉及食品安全监测技术领域，具体地说，涉及一种病原菌比色传感检测方法及其应用。

背景技术

多种细菌都可成为人畜病原菌，影响人畜健康。因此对于它们在食品等领域的检测监控十分必要。例如，沙门氏菌是一种重要的人畜共患病病原菌，可引起胃肠炎和腹泻疾病，还会引起动物伤寒、副伤寒、霍乱等疾病的发生；它还是引起食物中毒的一大原因。目前，沙门氏菌的定量检测主要依赖于传统的平板培养法、酶联免疫吸附试验(ELISA)、聚合酶链式反应(PCR)。平板培养法是细菌检测的金标准方法，但其劳动强度大，耗时长，一般至少需要3-5天。ELISA具有特异性强、通量高、成本低等优点，但其需要反复多次洗涤，因此可能会导致交叉污染和假阳性。PCR方法具有高的检测灵敏度、时间短，但它需要复杂的DNA提取过程和训练有素的专业技术人员。因此，仍有必要建立一种可快速、简单、现场检测食源性致病菌的方法，从而保证食品安全。

微流控芯片也被称为“芯片上的实验室”(lab-on-a-chip)，或微全分析系统，其具有样品和试剂消耗量小，分析时间短，微型化、便携化等优点。当前，基于比色、荧光、电化学、表面原子共振(SPR)、PCR等检测方法的微流控传感检测方法已经被广泛应用于食源性致病菌的定量检测中。其中，基于比色检测的微流控芯片技术可通过肉眼、紫外光谱或智能手机成像APP进行定量检测，快速得到可视化的检测结果。

核酸适配体(Aptamer)是一类对小分子、蛋白质或细胞具有高亲和力的单链DNA或RNA寡核苷酸。与单克隆抗体相比，适配体具有制备简便、改性方便、稳定性好、纯度高、生产成本低等特点。金纳米颗粒(AuNPs)具有表面等离子体共振对聚集态的敏感性，可产生颜色的改变，因此是开发快速比色生物传感检测方法的理想候选者。而众所周知，聚苯乙烯微球(PSs)具有粒径可调、表面官能团丰富、化学稳定性高等特点。PSs已被广泛用作抗体、抗原、链霉亲和素、分子信标、量子点等生物识别元件或荧光探针的载体，或作为纳米复合材料的核心/壳结构。仍有必要进一步研究如何将它们相互结合使用，以更好地实现比色传感检测。

且目前已有许多基于电、磁、气、光、pH、相变材料和声波表面波驱动(SAW)的微阀被开发并应用于微流控芯片中，以控制微通道中流体的流动方向。然而，这些微阀仍然存在着能耗高、成本高、结构复杂、部件多、易泄漏、需要外接驱动、死区大、不便于携带等缺点。因此，设计并构建一种简单、低成本、低能耗、便携式的微流控芯片微阀也是十分必要的。

发明内容

针对现有技术的问题，本发明的目的是提供一种简单、快速、高灵敏、现场的病原菌比色传感检测方法。

为了实现本发明的发明目的，本发明的技术方案如下：

一种病原菌比色传感检测方法，其通过结合有病原菌的适配体-PSs-半胱胺偶合物与AuNPs混合后的颜色变化获得病原菌的检测结果，所述适配体-PSs-半胱胺偶合物中的适配体可与待测病原菌结合。