[发明专利]谷胱甘肽转移酶检测试剂盒、制备方法及应用

说明书

本发明公开了一种谷胱甘肽转移酶检测试剂盒、制备方法及应用，该谷胱甘肽转移酶检测试剂盒包括以下组分：第一试剂，包括缓冲液、2,4‑二硝基氯苯、乙醇或甲醇、抗坏血酸氧化酶、表面活性剂和防腐剂；第二试剂，包括缓冲液、还原型谷胱甘肽、稳定剂、表面活性剂及防腐剂。抗坏血酸氧化酶能氧化还原性的抗坏血酸，减小抗坏血酸对检测结果的影响，乙醇或甲醇能帮助2,4‑二硝基氯苯更好地溶解。第二试剂中添加稳定剂能提高还原型谷胱甘肽的稳定性，保证检测结果的准确性。

技术领域

本发明涉及生化检测技术领域，特别是涉及一种谷胱甘肽转移酶检测试剂盒、制备方法及应用。

背景技术

谷胱甘肽转移酶即谷胱甘肽巯基转移酶(Glutathione S-transferases，GST)是一组与肝脏解毒功能有关的同工酶，其主要功能是催化某些内源性或外来有害物质的亲电子基团与还原型谷胱甘肽的巯基偶联，增加其疏水性使其易于穿越细胞膜而被排除体外，达到解毒的目的。因此，GST在保护细胞DNA及一些蛋白质免受亲电子化合物损伤中发挥着重要的生物学功能。此外，GST还具有抗诱变、降低肿瘤发生的抗肿瘤作用及增加癌细胞对化疗药物的代谢能力，产生抗药性。

GST分布较广，以肝中含量最高，约占肝脏可溶性蛋白的5％，当肝细胞损伤时会迅速释放到血液中。因此，外周血中此酶含量和活性的变化，在一定程度上反映了肝脏功能和损伤。据报道，在急性肝炎时GST明显升高，且较ALT(丙氨酸转氨酶)和AST(天门冬氨酸转氨酶)提前出现。因此GST测定对于早期肝损伤比测ALT更有一定的优越性。

目前，测定谷胱甘肽转移酶的方法主要有Elisa法和放射免疫法(RIA)，前者需要手工操作，耗时较长，步骤繁琐，成本较高，后者除存在放射性污染和对人体损伤的隐患外，还需要较高的实验室条件。

目前，国内外尚无谷胱甘肽转移酶检测试剂盒产品。

发明内容

本发明的一个目的在于提出一种简单快捷的谷胱甘肽转移酶检测试剂盒。

一种谷胱甘肽转移酶检测试剂盒，包括以下组分：

第一试剂，包括缓冲液、2,4-二硝基氯苯(CDNB)、乙醇或甲醇、抗坏血酸氧化酶、表面活性剂和防腐剂；

第二试剂，包括缓冲液、还原型谷胱甘肽(GSH)、稳定剂、表面活性剂及防腐剂。

本发明的有益效果是：抗坏血酸氧化酶能氧化还原性的抗坏血酸，减小抗坏血酸对检测结果的影响，乙醇或甲醇能帮助2,4-二硝基氯苯(CDNB)更好地溶解。第二试剂中添加稳定剂能提高还原型谷胱甘肽(GSH)的稳定性，保证检测结果的准确性。

另外，根据本发明提供的谷胱甘肽转移酶检测试剂盒，还可以具有如下附加的技术特征：

进一步地，所述第一试剂缓冲液和第二试剂缓冲液可以是磷酸盐缓冲液、MOPS、MOPSO缓冲液或Tris缓冲液。

进一步地，所述的表面活性剂为Triton X-100、吐温20的一种或两者组合。

进一步地，所述的稳定剂为TCEP、EGTA、EDTA-2Na及维生素C硬脂酸镁的一种或几种组合。

进一步地，所述防腐剂为叠氮钠或生物防腐剂。

进一步地，所述第一试剂和所述第二试剂中缓冲液的浓度均为50～200mmol/L，所述2,4-二硝基氯苯的浓度为1～5mmol/L，所述抗坏血酸氧化酶的浓度为0.5～5KU/L，所述乙醇或甲醇的含量为8～20％，所述第一试剂和所述第二试剂中表面活性剂的含量均为0.2～0.8％，所述还原型谷胱甘肽的浓度为5～50mmol/L，所述稳定剂的浓度为5～20mmol/L，所述第一试剂和所述第二试剂中防腐剂的浓度均为0.1～1g/L。