[发明专利]一种树脂及其制备方法以及其在制备头尾环肽中的应用

说明书

本发明公开了一种树脂及其制备方法以及其在制备头尾环肽中的应用，其中树脂的结构通式如下所示：本发明通过三次顺序化学修饰(即二硫醇试剂修饰、二(溴甲基)苯修饰和巯基乙胺修饰)2‑氯三苯甲基氯树脂获得该种新树脂。通过Fmoc固相合成和液相N端溴乙酰基与C端硫醇的反应，该树脂可直接用于制备不同链长的和结构的硫醚键键合的头尾环肽。

技术领域

本发明涉及一种树脂及其制备方法以及其在制备头尾环肽中的应用。本发明提供的树脂可用于快速制备含有不同链长和结构的硫醚键键合的头尾环肽，有利于头尾硫醚键键合环肽的硫醚连接臂结构优化。

背景技术

头尾相连的大环肽具有结构刚性，能够抵抗多种蛋白酶的水解，并具有更高的靶标选择性和细胞膜通透性，是现代多肽药物发现中一个极具吸引力的框架结构。在多肽药物的结构改造和功能改进方面，多肽的头尾环化修饰是一种极为常见的结构优化方式。目前，人们发展了多种合成头尾环肽的方法，包括天然化学连接、基于Ser的肽连接、C-C偶联、巯基双烷基化等。由于操作简单和合成成本低，巯基双烷基化策略被人们广泛应用于构建硫醚键键合的环肽，并已经成为组合文库和噬菌体文库中构建环肽的主流策略。

最近研究表明，硫醚键交联臂键长和键角的微小变化能够引起环肽的生物活性的显著变化。为了得到更高活性的、酶学稳定性更强的硫醚键键合的头尾相连大环肽，人们需要通过改变头尾环化连接臂的化学结构和连接臂的长短来进一步优化环肽的结构与功能。但是，对环肽连接臂化学结构和连接臂长短的优化涉及繁复的多步修饰操作，耗时和效率低。不同链长硫醚键键合的头尾环肽合成，前人方法涉及树脂上保护多肽的N端的巯基修饰和溶液中未保护肽头尾的巯基双烷基化。多肽的固相化学修饰和液相再环化过程往往存在操作繁琐和周期长的缺点。为了突破前人方法的困难，本发明中提供了一种新型树脂用于该类型环肽的快速直接合成，将有利于快速优化环肽连接臂的化学结构和连接臂的长短。

发明内容

本发明针对上述现有技术所存在的问题，提供了一种树脂及其制备方法以及其在制备头尾环肽中的应用。本发明提供的树脂结构可以轻松改变头尾环化连接臂的化学结构和连接臂的长短进而进一步优化环肽的结构与功能。

本发明树脂，其结构通式如下所示：

本发明树脂是通过对2-氯三苯甲基氯树脂依次进行二硫醇试剂修饰、二(溴甲基)苯修饰和巯基乙胺修饰后获得的，具体包括如下步骤：

步骤1：二硫醇试剂修饰2-氯三苯甲基氯树脂

80μmol的2-氯三苯甲基氯树脂在含有30％TFA的DCM中处理一段时间后，再与溶解在DCM的二硫醇试剂反应(800μmol，10倍当量)多次，直至树脂颜色由深红色变为浅黄色。

步骤2：树脂上未反应基团的封闭

在DCM洗涤树脂4次后，加入混合溶剂MeOH/DIEA/DCM，常温震荡30分钟。

步骤3：树脂上形成二硫键的还原

在DCM洗涤树脂4次后，加入混合溶剂β-ME/DIEA/NMP，常温震荡30分钟。

步骤4：二(溴甲基)苯修饰树脂

依次用DCM和DMF洗涤树脂4次，加入现配制的混合溶剂二(溴甲基)苯/DIEA/DMF反应混合液，常温震荡1小时。

步骤5：巯基乙胺修饰树脂

在DMF洗涤树脂4次后，加入现配制的混合溶剂巯基乙胺/DIEA/DMF，常温震荡1小时。

步骤6：树脂上未反应基团的封闭

在DMF洗涤树脂4次后，加含20％哌啶的DMF溶液，常温震荡30分钟。