[发明专利]一种检测乳中2’-岩藻糖基乳糖的方法

说明书

本发明提供了一种检测乳中2’‑岩藻糖基乳糖的方法，包括以下步骤：样品前处理步骤：在液态乳或将乳粉溶于水获得的乳粉溶液中，加入蛋白质沉淀剂沉淀蛋白，然后过滤；样品净化步骤：利用滤膜和净化柱对样品进行净化；样品检测步骤：通过阴离子交换色谱进行测定。本发明的样品前处理简单、快速，并且可以提高检测准确性。

本申请要求于2020年3月13日提交中国专利局、申请号为202010179206.0、发明名称为“一种检测乳中母乳低聚糖的方法”的中国专利申请的优先权，其全部内容通过引用结合在本申请中。

技术领域

本发明涉及分析检测技术领域，尤其涉及一种检测乳中2’-岩藻糖基乳糖的方法，更具体的，涉及一种采用高效阴离子交换色谱-脉冲电化学检测法检测乳中2’-岩藻糖基乳糖的方法。

背景技术

母乳低聚糖(human milk oligosaccharides，HMOs)是人类母乳中的第三大固体组分，仅次于乳糖和脂肪，母乳中HMOs含量在3-23g/L，目前已分离鉴定出200多种成分，其中2’-岩藻糖基乳糖(2’-FL)是母乳中含量最高的低聚糖成分，占低聚糖总量的20％左右。HMOs能被肠道内细菌选择利用，可作为益生元有效促进肠道内有益菌双歧杆菌生长、抗感染药物和免疫系统调节剂，2’-FL能够明显降低婴幼儿由弯曲杆菌引发的腹泻，并且其含量与腹泻发生率成负相关。牛乳中含有4.5％的碳水化合物，其中乳糖的含量超过80％，寡糖含量约占总糖含量的4％；羊乳中寡糖含量很少，仅为0.25-0.30g/L；婴幼儿配方乳粉基粉主要是牛乳和羊乳，在婴幼儿配方食品中添加适量的HMOs成分是实现母乳化的重要标志，目前HMOs还未在乳粉中广泛应用，但EFSA及FDA均已批准了2’-FL可在婴儿食品中使用，国内也在积极推进法规。建立乳粉中2’-FL的检测方法是将2’-FL作为新的营养/功能性成分开发婴幼儿配方奶粉新产品的必要条件，检测方法的准确与否更是非常重要。

目前HMOs的定量测定方法有高效液相色谱法、超高效液相色谱法-荧光检测法(UHPLC-FLD)、液相色谱-质谱/质谱(LC-MS/MS)、多孔石墨化碳-液相色谱-质谱/质谱(PCG-LC-MS/MS)、毛细管电泳-电喷雾电离-质谱/质谱(CE-ESI-MS/MS)、高效阴离子交换色谱-脉冲电化学检测法(HPAEC-PAD)等，2’-FL的检测方法主要是经过脱脂、除蛋白、寡糖富集等前处理后采用高效液相色谱串联质谱法，采用1-苯基-3-甲基-5-唑啉酮在糖链还原端发生缩合反应进行衍生；2-氨基吖啶酮在糖链还原端引入发色基团，生成稳定的产物，提高糖的检测灵敏度；采用硼氢化钠还原糖生成糖醇后测定。专利CN107192771A《母乳低聚糖快速定性定量的方法》公开了采用低温离心去除脂肪，乙腈沉淀蛋白的方法，采用氨基色谱柱分离寡糖，高效液相色谱串联质谱法定性定量，此方法在测定母乳中2’-FL具有较好的结果。专利CN107621399A《一种检测母乳中低聚糖的方法》公开了采用低温离心去除脂肪，乙醇沉淀蛋白的方法，采用多孔石墨碳色谱柱分离寡糖，高效液相色谱串联质谱法定性定量，得到2’-FL回收率70-90％。

但大多数方法测定的目标样本是母乳，乳粉中2’-FL的检测方法报道较少。乳粉中2’-FL添加量可能会低于母乳中2’-FL水平，检测2’-FL时稀释度与母乳不同，检测时受乳糖的干扰较母乳中检测时的干扰明显。因此，母乳中2’-FL的检测方法不适用于乳粉，需要再进行试验和优化。现有的检测方法的准确性低，无法准确检测婴配粉中2’-FL含量，将无法控制婴配粉中2’-FL的添加量，从而导致无法评判生产出的产品是否符合法规要求。

发明内容

本发明的是针对现有技术存在的缺陷和不足，提供一种检测乳中2’-FL的检测方法。本发明克服了现有技术中前处理复杂、成本高、时间长等不足；采用包含阴离子交换色谱柱的离子色谱仪，通过选用合适的色谱条件，提高了检测结果的准确性。

本发明提出的检测乳中2’-FL的方法，包括以下步骤：

样品前处理步骤：在液态乳或将乳粉溶于水获得的乳粉溶液中，加入蛋白质沉淀剂沉淀蛋白，然后过滤；