[发明专利]一种检测1,5-AG的试剂盒和检测方法

说明书

本发明提供了一种检测1,5‑AG的试剂盒和检测方法。本发明第一方面提供了一种检测1,5‑AG的试剂盒，包括第一试剂和第二试剂，其中，所述第一试剂包括葡萄糖变构酶、葡萄糖氧化酶、过氧化物酶、抗坏血酸氧化酶、胆红素氧化酶、4‑AAP、表面活性剂、pH缓冲液、防腐剂以及稳定剂，所述第二试剂包括吡喃糖氧化酶、TOOS、pH缓冲液、防腐剂和稳定剂。采用本发明提供的试剂盒，能够利用紫外、可见光分析仪或者半自动/全自动生化分析仪检测出1,5‑AG的浓度，检测过程中不受葡萄糖，甘露糖，果糖等血清重糖类化合物的干扰，具有稳定性高、检测速度快、准确度高的优点。

技术领域

本发明涉及临床生化诊断领域，尤其涉及一种检测1,5-AG的试剂盒和检测方法。

背景技术

1,5-脱水山梨醇(1,5-anhydroglucitol,1,5-AG)，又叫做2-脱氧葡萄糖、1,5-脱水葡萄糖醇，分子式为C₆H₁₂O₅(分子量164.2，CAS号为154-58-5)，是一种具有吡喃环结构的六碳单糖，其结构与吡喃葡萄糖结构十分相似，主要区别在于吡喃葡萄糖C-1 位置上的羟基被氢所取代，形成C1椅形氧环，其结构决定了其具备较好的化学稳定性。

1,5-AG的浓度检测具有重要的临床意义，例如：正常情况下，血清中1,5-AG代谢稳定，浓度稳定在12-40mg/L，但当人体患糖尿病时，血清中1,5-AG的浓度会显著降低，主要原因是当人体患糖尿病时，大量葡萄糖由尿中排出竞争性的抑制了1,5-AG 的重吸收，从而使得1,5-AG大量经尿排出，导致血清中1,5-AG浓度降低，因此，血清中1,5-AG的浓度水平用于糖尿病诊断和疗效检测的常规指标；在非糖尿病人群中 1,5-AG浓度可以作为餐后血糖的筛查指标，监测餐后高血糖相关的心血管危险的发生；在慢性肾功能衰竭的病人的血清或尿液中1,5-AG的浓度也会明显下降，这是由于 1,5-AG重吸收减少造成的，血清或尿液中1,5-AG的浓度可很好的反映肾小管重吸收功能。

1,5-AG浓度的检测方法有很多，目前可实现自动分析的方法主要包括 ADP-HK-NADPH法和GK-PROD法，其中，ADP-HK-NADPH法原理主要为：1,5-AG 在ADP依赖性己糖激酶(ADP-HK)的作用下生成AG-6磷酸(AG-6-P)，AG-6-P再和 NADP进行反应，生成NADPH，NADPH具有还原性，和显色剂作用生成显色物质，通过对显色物质进行比色，即可得知1,5-AG的浓度；GK-PROD法的原理主要为：使用吡喃糖氧化酶(PROD:EC1.1.3.10)、葡萄糖激酶(EC2.7.1.2)和三磷酸腺苷(ATP) 重生系统可检测1,5-AG的浓度变化，葡萄糖激酶和ATP重生系统可将葡萄糖转化为不与吡喃糖氧化酶反应的葡萄糖-6-磷酸，吡喃糖氧化酶氧化1,5-AG生成的过氧化氢可通过TRINDER反应进行检测，该方法可针对1,5-AG进行检测，可避免葡萄糖的干扰。

发明内容

有鉴于现有技术的上述缺陷，本发明所要解决的技术问题是提供一种检测1,5-AG的试剂盒和检测方法。

为实现上述目的，本发明第一方面提供了一种检测1,5-AG的试剂盒，包括第一试剂和第二试剂，其中，所述第一试剂包括葡萄糖变构酶、葡萄糖氧化酶、过氧化物酶、抗坏血酸氧化酶、胆红素氧化酶、4-AAP、表面活性剂、pH缓冲液、防腐剂以及稳定剂，所述第二试剂包括吡喃糖氧化酶、TOOS、pH缓冲液、防腐剂和稳定剂；

所述pH缓冲液控制所述第一试剂和第二试剂的pH为5.00-9.00。