[发明专利]一种快速检测巨细胞病毒中和抗体效价的方法

权利要求书

1.一种检测巨细胞病毒中和抗体效价的方法，其特征在于，包括：

步骤1：将含有巨细胞病毒中和抗体的待检样品和巨细胞病毒人免疫球蛋白标准品分别与巨细胞病毒液混合，孵育；

步骤2：将所述孵育所得混合液接种成纤维细胞，培养；

步骤3：将所述培养所得细胞用细胞固定液固定，洗板，依次加入一抗溶液、二抗溶液或酶标二抗溶液和底物，得到待测液；

步骤4：将所述待测液进行图像采集，计数斑点，并基于斑点数确定所述待测样品中巨细胞病毒中和抗体效价；

其中，所述巨细胞病毒液的滴度为1400～5600CCID₅₀/孔。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，按体积比计算，所述细胞固定液选自80％以上的丙酮溶液或95％的乙醇溶液；

任选地，所述固定的时间为15～25分钟，温度为-22～4℃；

任选地，所述巨细胞病毒液的滴度为1400～5000CCID₅₀/孔；

任选地，所述巨细胞病毒液的滴度为5000CCID50/孔；

任选地，所述待检样品为HCMV IgG产品、中间品、半成品或血浆。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待检样品或巨细胞病毒人免疫球蛋白标准品与所述巨细胞病毒液的体积比为1：(0.8～1.2)。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3中，进行所述加入一抗溶液之前，不采用封闭液进行封闭处理。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待测样品选自血浆或免疫球蛋白制品。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，进行步骤1之前，预先采用细胞维持液对所述待测样品进行稀释处理，

当所述待测样品为血浆时，所述稀释处理的稀释度为2^-4～-6；

当所述待测样品为免疫球蛋白制品时，所述稀释处理的稀释度为2^-5～-7；

任选地，按体积比计算，所述细胞维持液选自含4～6％胎牛血清的EMEM液体培养基。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3中，所述洗板后，进一步包括如下步骤：

加入一抗溶液，孵育，洗板，加入二抗溶液，孵育，洗板，加入酶，孵育，洗板，加入底物，静置，得到所述待测液；或者

将所述培养所得细胞用细胞固定液固定，洗板，加入一抗溶液，孵育，洗板，加入酶标二抗溶液，孵育，洗板，加入底物，静置，得到所述待测液；

任选地，所述一抗溶液是通过将浓度为0.5～2mg/mL的一抗稀释1500～2500倍所获得的，所述二抗溶液是通过将浓度为1～3mg/mL的二抗稀释4500～5500倍所获得的，酶标二抗溶液是通过将1～3mg/mL的酶标二抗稀释4500～5500倍所获得的；

任选地，所述一抗选自抗CMV IE1和/或IE2抗体，所述二抗选自生物素标记的羊抗鼠抗体，所述加入酶所采用的酶选自辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素，所述酶标二抗选自酶标记的羊抗鼠抗体；

任选地，所述酶标记的羊抗鼠抗体选自辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠抗体、碱性磷酸酶或其衍生物标记的羊抗鼠抗体；

任选地，按质量体积比计算，所述一抗溶液、二抗溶液或酶标二抗溶液中的稀释剂为含有0.4～0.6％牛血清蛋白的PBS溶液。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，按体积比计算，所述洗板所采用的洗涤液为0.005～0.015％的吐温20溶液。

9.一种基于权利要求1～8任一项所述方法的检测巨细胞病毒中和抗体效价的试剂盒。

10.一种制备巨细胞病毒人免疫球蛋白的方法，其特征在于，包括：采用权利要求1～8任一项所述方法筛选原料血浆。