[发明专利]一种有效降低PKA含量的人血白蛋白的制备方法

权利要求书

1.一种有效降低PKA含量的人血白蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）调节FIV分离液离子强度：在FI+II+III/FII+III上清液中添加0.8～1.2mol/L的磷酸盐缓冲液，将离子强度控制在0.08～0.12，得到调节了离子强度的上清液；

（2）调节FIV分离液pH：用醋酸盐缓冲液将所述的调节了离子强度的上清液的pH调节至5.8～6.2，得到调节了pH的上清液；

（3）添加乙醇并调节反应温度：在所述的调节了pH的上清液中添加体积分数为95%的-15℃以下的乙醇至乙醇的体积达混合液体积的38～42%，将混合液的温度调节至-5～-7℃，得到调温的混合液；

（4）沉淀老化：将所述的调温的混合液静置6小时以上，得到静置液；

（5）离心分离FIV：在-5～-7℃条件下离心所述的静置液，分离去除FIV沉淀，得到离心分离的上清液；

（6）澄清过滤：在所述的离心分离的上清液中加入助滤剂，使得助滤剂的浓度达5～15g/L；用滤板过滤，过滤压力不超过0.3Mpa，收集澄清过滤液；

（7）等电点沉淀：将所述的澄清过滤液的pH调节至4.7～4.9、乙醇体积达所述的澄清过滤液体积的38～42%、温度达-8～-10℃，静置6小时以上，得到沉淀混悬液；

（8）分离FV沉淀：在-8～-10℃条件下离心所述的沉淀混悬液，收集FV沉淀；

（9）FV沉淀精制：用2～4倍体积的0～5℃注射用水溶解所述的FV沉淀，溶解液温度保持在-2～-3℃，得到FV沉淀溶解液；

（10）A50吸附：在所述的FV沉淀溶解液中添加经过预处理的A50凝胶搅拌吸附4～5小时，得到A50凝胶吸附的悬浊液；所述的经过预处理的A50凝胶的添加量为每公斤蛋白质添加3～5g；

A50凝胶预处理的方法为：在每克凝胶中加入250ml注射用水膨胀15分钟，用300um滤袋网过滤，将收集的凝胶于121℃、0.21Mpa条件下处理30分钟，即得预处理的A50凝胶；

（11）活性炭滤板吸附：用活性炭滤板过滤所述的A50凝胶吸附的悬浊液，收集澄清滤液，并将pH调节至7.0～7.5，得到调节了pH的澄清滤液；

（12）超滤透析配制：用10KD超滤膜对所述的调节了pH的澄清滤液进行浓缩，得到第一浓缩液；用不少于8倍体积的透析液恒定体积透析后进行浓缩，得到第二浓缩液；在第二浓缩液中添加辛酸钠，配制得到蛋白质含量为100g/L或200g/L、辛酸钠含量为0.16mmol/g蛋白、pH为6.4～7.4的原液；

（13）巴氏病毒灭活：所述的原液巴氏灭活温度为60℃±0.5℃，巴氏灭活时间在10小时以上；

（14）除菌、分装、检验，即得所述人血白蛋白。

2.根据权利要求1所述的一种有效降低PKA含量的人血白蛋白的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中在FI+II+III/FII+III上清液中添加1.0mol/L的磷酸盐缓冲液，将离子强度控制在0.10，得到调节了离子强度的上清液。

3.根据权利要求1所述的一种有效降低PKA含量的人血白蛋白的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中用醋酸盐缓冲液将所述的调节了离子强度的上清液的pH调节至6.0，得到调节了pH的上清液。

4.根据权利要求1所述的一种有效降低PKA含量的人血白蛋白的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中在所述的调节了pH的上清液中添加体积分数为95%的-15℃以下的乙醇至乙醇的体积达混合液体积的40%，将混合液的温度调节至-6℃，得到调温的混合液。

5.根据权利要求1所述的一种有效降低PKA含量的人血白蛋白的制备方法，其特征在于，所述步骤（6）中所使用的助滤剂是CELITE503硅藻土助滤剂。

6.根据权利要求5所述的一种有效降低PKA含量的人血白蛋白的制备方法，其特征在于，所述步骤（7）中将所述的澄清过滤液的pH调节至4.8、乙醇体积达所述的澄清过滤液体积的40%、温度达-9℃，静置6小时以上，得到沉淀混悬液。