[发明专利]一种降低人血白蛋白货架期铝离子释放的方法

权利要求书

1.一种降低人血白蛋白货架期铝离子释放的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）FII+III/FI+II+III分离：在FI上清液或血浆中添加醋酸盐缓冲液，将pH调节至5.8～6.2；再加入预冷的体积分数为95%的乙醇至乙醇的体积达混合液体积的18～22%，同时将混合液温度降至-6～-4℃，沉淀老化，得到第一静置液；在-6～-4℃条件下离心所述的第一静置液，得到离心分离的上清液；

（2）FIV分离：在所述的离心分离的上清液中添加醋酸盐缓冲液，将pH调节至5.8～6.2,再加入预冷的体积分数为95%的乙醇至乙醇的体积达混合液体积的38～42%，同时将混合液温度降至-7～-5℃，搅拌反应时间不少于2小时，沉淀静放老化6小时以上，得到第二静置液；在-7～-5℃条件下离心分离第二静置液，收集上清液；按5～15g/L比例加入经酸洗处理的助滤剂，使用滤板进行深层过滤，过滤压力不超过0.3Mpa，收集澄清过滤液；

所述经酸洗处理的助滤剂是指经酸洗处理的硅藻土；经酸洗处理的硅藻土的制备方法为：1）将经干烤的硅藻土按90～110g/L的比例加入9～11mM/L枸橼酸钠溶液中，充分搅拌后用布氏漏斗抽真空；2）再将硅藻土加入注射用水中，充分搅拌后用布氏漏斗抽真空；3）重复上述步骤2）；4）将助滤剂加入体积分数为40%的乙醇溶液中进行搅拌，再用pH4.0的醋酸盐缓冲液将溶液pH调节至5.8～6.2，布氏漏斗抽真空，即得所述的经酸洗处理的硅藻土；

（3）滤芯过滤：将所述的澄清过滤液降低至-8～-6℃，静置6小时以上，并用滤芯过滤，收集上清液；用0.45～0.55mol/L的氢氧化钠调节上清液的pH至6.4～7.4，得到调节了pH的上清液；

（4）透析缓冲液配制：配制0.152～0.156mol/L氯化钠溶液，用0.9～1.1mol/L氢氧化钠溶液调节氯化钠溶液的pH至7～9，温度调节至2～25℃，即得透析缓冲液；

（5）浓缩：用10KD超滤膜浓缩所述的调节了pH的上清液，跨膜压力为0.1～0.3Mpa，得到浓缩液；

（6）透析：用所述的透析缓冲液透析所述的浓缩液，所述的透析缓冲液的使用量不低于所述浓缩液的8倍体积，得到透析的浓缩液；

（7）原液配制：所述的透析的浓缩液进行浓缩后，添加辛酸钠，配制得到蛋白质含量为200g/L或100g/L，辛酸钠含量为0.16mmol/g蛋白，pH为6.4～7.4的原液；

（8）巴氏灭活：所述的原液的巴氏灭活温度为60℃±0.5℃，巴氏灭活时间在10小时以上，得到巴氏灭活的原液；

（9）培育：将巴氏灭活的原液进行无菌灌装，后置于温度为30±2℃的孵室培育至少14天，即得人血白蛋白制品。

2.根据权利要求1所述的一种降低人血白蛋白货架期铝离子释放的方法，其特征在于，所述步骤（1）中在FI上清液或血浆中添加pH4.0的醋酸盐缓冲液，将pH调节至5.8～6.2；再加入温度在-15℃以下、体积分数为95%的乙醇至乙醇的体积达混合液体积的18～22%，同时将混合液温度降至-6～-4℃，沉淀老化，得到第一静置液；在-6～-4℃条件下离心所述的第一静置液，得到离心分离的上清液；离心工艺参数为：离心机转速为15000rpm。

3.根据权利要求1所述的一种降低人血白蛋白货架期铝离子释放的方法，其特征在于，所述步骤（2）中在所述的离心分离的上清液中添加pH4.0的醋酸盐缓冲液，将pH调节至5.8～6.2, 再加入温度在-15℃以下、体积分数为95%的乙醇至乙醇的体积达混合液体积的38～42%，同时将混合液温度降至-7～-5℃，搅拌反应时间不少于2小时，沉淀静放老化6小时以上，得到第二静置液；在-7～-5℃条件下离心分离第二静置液，收集上清液，离心机转速为15000rpm；按5～15g/L比例加入经酸洗处理的助滤剂，使用滤板进行深层过滤，过滤压力不超过0.3Mpa，收集澄清过滤液。

4.根据权利要求1所述的一种降低人血白蛋白货架期铝离子释放的方法，其特征在于，所述步骤（3）中将所述的澄清过滤液降低至-7℃，静置6小时以上，并用滤芯过滤，收集上清液；用0.5mol/L的氢氧化钠调节上清液的pH至6.4～7.4，得到调节了pH的上清液。