[发明专利]一种高灵敏度肌酸激酶同工酶检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种高灵敏度肌酸激酶同工酶检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括试剂R1和试剂R2；

所述试剂R1成分及含量为：第一缓冲液10-200mM，无机盐5-30g/L，增浊剂2-40g/L，表面活性剂0.01-3g/L，第一防腐剂0.5-1.53g/L，阻断剂1-3g/L，溶剂为纯化水；

所述试剂R2包括胶乳微球试剂和胶乳保存液；所述胶乳微球试剂为偶联有至少两种鼠抗人CK-MB单克隆抗体的胶乳微球；所述胶乳保存液成分及含量为：第二缓冲液10-200mM，稳定剂30-150g/L，第二防腐剂0.3-1g/L，溶剂为纯化水。

2.根据权利要求1所述的一种高灵敏度肌酸激酶同工酶检测试剂盒，其特征在于，所述第一缓冲液为三羟甲基氨基甲烷缓冲液、4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、甘氨酸缓冲液、2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液、3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸缓冲液中的一种；

所述无机盐为氯化钠、氯化镁、氯化钾、氯化锌、氯化钙中的一种或几种；

所述增浊剂为PVP、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、聚乙二醇8000、葡聚糖中的一种或几种；

所述表面活性剂为吐温-20、吐温-80、曲拉通X-100中的一种或多种；

所述第一防腐剂为Proclin300和叠氮化钠中的一种或几种。

3.根据权利要求1所述的一种高灵敏度肌酸激酶同工酶检测试剂盒，其特征在于，所述第二缓冲液为三羟甲基氨基甲烷缓冲液、4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液、磷酸盐缓冲液中的一种；

所述稳定剂为BSA、蔗糖、海藻糖、甘露醇、甘油、羧甲基纤维素钠、明胶中一种或多种；

所述防腐剂为Proclin300、硫柳汞、叠氮化钠中一种。

4.一种高灵敏度肌酸激酶同工酶检测试剂盒制备方法，包括以下步骤：

试剂R1制备：称取无机盐5-30g/L，增浊剂2-40g/L，表面活性剂0.01-3g/L，第一防腐剂0.5-1.53g/L，阻断剂1-3g/L，将上述组分溶于10-200mM第一缓冲液中，充分搅拌促进溶解，加纯化水混合均匀，并调整pH为7.0-7.8，制得试剂R1；

试剂R2制备：首先将抗鼠IgG-Fc抗体与胶乳微球表面氨基反应形成shiff碱，使抗鼠IgG-Fc抗体定向标记于胶乳微球上，再将抗鼠IgG-Fc抗体与至少两种鼠抗人CK-MB单克隆抗体连接，使胶乳微球偶联上鼠抗人CK-MB单克隆抗体，制得胶乳微球试剂，然后将胶乳微球试剂加入封闭缓冲液重悬超声后进行封闭，再加入胶乳保存液重悬超声制得胶乳试剂，至少两种胶乳试剂混合制成试剂R2。

5.根据权利要求4所述的一种高灵敏度肌酸激酶同工酶检测试剂盒，其特征在于，所述抗鼠IgG-Fc抗体与鼠抗人CK-MB单克隆抗体的摩尔比为1-2:1。

6.根据权利要求4所述的一种高灵敏度肌酸激酶同工酶检测试剂盒，其特征在于，所述抗鼠IgG-Fc抗体定向标记的胶乳微球为氨基聚苯乙烯胶乳微球，直径为100-350nm。

7.根据权利要求4所述的一种高灵敏度肌酸激酶同工酶检测试剂盒，其特征在于，所述定向标记技术采用高碘酸钠氧化法将抗鼠IgG-Fc抗体Fc端糖链邻二醇氧化为醛基，与胶乳微球上的氨基形成shiff碱。