[发明专利]秦巴硒菇提取物对慢性髓系白血病的实验研究方法

说明书

本发明公开一种秦巴硒菇提取物对慢性髓系白血病的实验研究方法，选取秦巴硒菇提取物酸性RNA蛋白复合物FA‑2‑b‑β作用于慢性髓系白血病K562细胞株、慢性髓系原代白血病细胞，通过Wnt/β‑catenin、Caspase信号通路研究其对慢性髓系白血病凋亡的影响机制，为秦巴硒菇的临床应用提供实验依据。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及秦巴硒菇提取物对慢性髓系白血病的实验研究方法。

背景技术

慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia，CML)是一种起源于骨髓多能造血干细胞的双向多能造血干细胞衍生而来的骨髓恶性克隆增殖性肿瘤。其特征为费城染色体(Ph)(9：22)(q34：q11)相互移位形成BCR-ABL致癌基因，是一种组成型激活的酪氨酸正玄激酶，通过下游效应分子磷酸化驱动CML的发生。大部分CML患者表达酪氨酸激酶活性的BCR-ABL融合蛋白，该蛋白是一种组成型激活的酪氨酸正弦激酶，BCR-ABL酪氨酸激酶通过下游效应分子磷酸化驱动引起细胞增殖不受控，髓样细胞异常增长，进而引起CML的发生。CML的治疗以BCR-ABL酪氨酸激酶抑制剂IM为第一代治疗CML患者的临床一线药物，该药抑制白血病细胞增殖的机制可能是通过靶向抑制BCR-ABL酪氨酸蛋白激酶活性。IM在21世纪批准为临床治疗患者后，其临床治疗疗效好，明显改善了CML患者的预后和生存期。然而，随着治疗时间的延长，仍有部分患者在治疗后并未达到细胞遗传学和分子生物学的缓解。人们试图从传统中药中寻找价格低廉、多靶点、毒副作用小的天然中药为CML治疗提供给新的方案。

秦巴硒菇又名姬松茸、粱金菇，属于担子菌纲。巴西、日本、秘鲁、我国福建、湖北、贵州、陕西、云南等多地种植，营养和药用价值丰富，是一种药食兼用的珍稀真菌类。随着国内外学者对秦巴硒菇研究的不断深入，从秦巴硒菇子实体多糖中分离得到结构为β-1,6-葡聚糖，能够抑制肿瘤细胞增殖，调节肿瘤细胞的生长及衰老，且能提高机体免疫力，其机制可能是通过诱导肿瘤细胞凋亡而发挥良好的抗肿瘤效应。

发明内容

本发明选取秦巴硒菇提取物酸性RNA蛋白复合物FA-2-b-β作用于慢性髓系白血病K562细胞株、慢性髓系原代白血病细胞，通过Wnt/β-catenin、Caspase信号通路研究其对慢性髓系白血病凋亡的影响机制，为秦巴硒菇的临床应用提供实验依据。

本发明采用的技术方案：

秦巴硒菇提取物对慢性髓系白血病的实验研究方法，该方法包括以下步骤：

步骤S1：秦巴硒菇提取物对体外白血病细胞的实验研究

S101：测定秦巴硒菇提取物对白血病细胞的敏感性

S102：检测细胞凋亡率

S103：检测细胞周期

步骤S2：秦巴硒菇提取物对慢性髓系白血病动物的实验研究

S201：慢性髓系白血病动物模型的建立

选择4-5周龄，体重为18-20g的雄性NOD/SCID小鼠，于SPF环境中，温度为22±1℃，自由进食水喂养一周后，小鼠状态良好；取对数生长期的原代细胞，用0.9％的生理盐水将细胞密度调整至1×10⁶/mL，将细胞悬液通过尾静脉接种于NOD/SCID小鼠，接种体积为200μL，空白组小鼠尾静脉注射等量的0.9％的生理盐水，动态观察模型小鼠精神、食欲、体重、活动能力、腹水及生存时间；接种细胞悬液两周后，将发病小鼠随机分成实验组、空白对照组和阳性对照组，每组6只，实验组的小鼠尾静脉注射浓度梯度为50，75，100mg/kg的FA-2-b-β，空白对照组的小鼠尾静脉注射等量0.9％的生理盐水，阳性对照组的小鼠尾静脉注射等量5mg/kg的伊玛替尼；实验期间每天观察模型小鼠精神、体重、体毛改变及活跃情况，记录模型小鼠死亡时间并绘制生存曲线，设定实验观察终点为120天；

S202：模型小鼠外周血细胞数、体重检测；