[发明专利]一种白蛋白/透明质酸纳米复合物-铂类前药及制备方法和应用

说明书

本发明提供一种白蛋白/透明质酸纳米复合物‑铂类前药及制备方法和应用，利用碳二亚胺法制备出酰肼化透明质酸；将其与白蛋白制成质量浓度为0.05％～10％、pH为6～10的水溶液；在搅拌条件下以0.5～20毫升/分钟的速度滴加乙醇，其用量为水溶液体积的2～10倍；加入醛基化透明质酸溶液，反应1～24小时后离心分离出纳米复合物；将纳米复合物与铂类药物溶液混合0.5～12小时，经离心分离和冷冻干燥过程得到铂类纳米前药。该铂类纳米前药粒径在80～150纳米范围可控，载药量可达20％，纳米复合物生物相容性优异。该制备方法原料易得、工艺过程简单、反应条件温和，适用于多种铂类抗肿瘤药物。

技术领域

本发明属于生物医药材料领域，具体涉及一种白蛋白/透明质酸纳米复合物-铂类前药及制备方法和应用。

背景技术

透明质酸是天然生物高分子，具有优异的吸水和保水性能、生物相容性和生物可降解性，并且没有免疫原性或免疫原性极低，已广泛用于化妆品、整形、美容产品和药物载体等领域。尤其是在药物载体方面，透明质酸含有丰富的侧羧基，改性方法灵活多样，既可制备纳米药物载体，也可制成载药物的可注射凝胶体系，在药物靶向递送和局部递送中应用广泛。

铂类抗肿瘤药物在肿瘤化疗中具有举足轻重的地位，很多肿瘤的化疗方案都会涉及铂类抗肿瘤药物。然而，目前铂类抗肿瘤药物多是以游离态的溶液形式施用，存在肿瘤积累效率低、对正常组织的毒副作用大、易代谢排出体外等问题，严重制约着铂类抗肿瘤药物的临床应用。近些年的研究表明，将铂类抗肿瘤药物搭载于纳米载体中，可克服游离态药物存在的上述问题。目前研究主要聚焦于顺铂的纳米化，主要途径有两类：一是，由于顺铂没有可直接用于连接于载体的化学键，通常需要进行羧基化改性再通过化学键连接于载体上，存在改变药物效果的风险或程序复杂的问题；二是，将顺铂经羧基-铂配位作用载于含羧基的载体上，但这种方法通常需要24～36小时的配位反应过程，制备周期较长且装载效率不够理想。

白蛋白是球形蛋白，具有优异的生物相容性和生物可降解性以及无免疫原性，具有作为疏水性化疗药物递送载体的天然优势，可显著增加难溶性药物在血浆中的溶解度、延长药物半衰期和降低药物毒副作用，已用于紫杉醇、白藜芦醇、甲氨蝶呤等药物的递送。然而，白蛋白在铂类抗肿瘤药物递送中的应用极少。与此同时，白蛋白作为纳米载体的一个重要技术难题是实现纳米颗粒结构的稳定。目前，多采用戊二醛交联方法，然而它存在明显的细胞毒性。

发明内容

本发明的目的是提供一种白蛋白/透明质酸纳米复合物-铂类前药及制备方法和应用，既避免使用对细胞有毒性的戊二醛交联剂，又无需对铂类抗肿瘤做任何化学或物理修饰，还克服了现有铂类抗肿瘤药物载体适用铂类药物数量单一、药物装载时间长、效率不高等问题。

本发明的一种白蛋白/透明质酸纳米复合物-铂类前药的制备方法，包括以下步骤：

一种白蛋白/透明质酸纳米复合物-铂类前药的制备方法，包括如下步骤：

(1)向透明质酸水溶液中加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，活化羧基反应0.5～6小时，再加入二元酰肼室温反应12～72小时，经透析和冷冻干燥，得到酰肼化透明质酸；

(2)将白蛋白和酰肼化透明质酸制成pH为6～10的水溶液，然后滴加乙醇，滴毕后加入醛基化透明质酸溶液，继续搅拌1～24小时，经离心分离和冷冻干燥，得到白蛋白/透明质酸纳米复合物；

(3)将白蛋白/透明质酸纳米复合物分散于水中形成悬液，将悬液与铂类抗肿瘤药物溶液混合，搅拌0.5～12小时后进行离心和冷冻干燥，得到白蛋白/透明质酸纳米复合物-铂类前药。

本发明进一步的改进在于，所述步骤(1)中的透明质酸的分子量为3000Da～1000kDa；透明质酸水溶液的质量浓度为1％～10％；1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的加入量为透明质酸中羧基摩尔数的6％～65％。