[发明专利]非小细胞肺癌对培美曲塞耐药性的研究方法

说明书

本发明公开了一种非小细胞肺癌对培美曲塞耐药性的研究方法，通过对非小细胞肺癌培美曲塞A549/PEM耐药细胞株中的差异表达蛋白的研究来实现非小细胞肺癌对培美曲塞耐药性的研究，具体操作步骤包括，S1：非小细胞肺癌培美曲塞A549/PEM耐药细胞株的构建及鉴定；S2：A549/PEM耐药细胞株蛋白质组iTRAQ分析；S3：A549/PEM耐药细胞株蛋白定量分析；S4：对比分析步骤S2和步骤S3中的结果，验证A549/PEM耐药细胞株中蛋白的差异表达。S5：对步骤S4中经过验证的差异蛋白进行分析，筛选出两个差异蛋白进行药物敏感性研究。本发明中通过差异表达蛋白的研究，为后续影响A549/PEM细胞耐药性的基因筛选提供基础，为PEM耐药NSCLC患者的临床治疗提供理论依据。

技术领域

本发明涉及非小细胞肺癌技术领域，尤其涉及非小细胞肺癌对培美曲塞耐药性的研究方法。

背景技术

肺癌是一种常见的恶性肿瘤，也是导致癌症相关死亡的主要原因。非小细胞肺癌(NSCLC)占所有新诊断肺癌的约85％，包括腺癌，鳞状细胞癌，大细胞癌。NSCLC患者在早期多不表现典型的临床症状，大多患者在确诊时已发展为中晚期肺癌，这也极大程度的增加了患者的临床治疗难度。近年来，随着研究的不断深入，NSCLC早期诊断及治疗技术也有所改善，但患者的5年生存率仍不容乐观，癌症复发和高转移率也是导致NSCLC治疗失败的主要原因。化疗是针对NSCLC的常用的一线或二线治疗方法，其中培美曲塞(MTA)药物化疗是近年来应用较为广泛的化疗药物，主要通过破坏细胞内叶酸依赖性的正常代谢过程，抑制细胞复制，从而抑制肿瘤的生长。尽管该治疗方法在一定程度上改善了患者的治疗效果，但随着治疗时间的推移，越来越多的患者对其产生耐药性，从而导致治疗失败。因此，了解NSCLC潜在的耐药机制并研究新的分子治疗技术以提高NSCLC癌对MTA化疗药物的敏感性是当前研究的重点。

发明内容

针对上述存在的问题，本发明旨在提供一种通过研究非小细胞肺癌培美曲塞A549/PEM耐药细胞株中的差异表达蛋白来研究非小细胞肺癌对培美曲塞耐药性的方法。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案如下：

非小细胞肺癌对培美曲塞耐药性的研究方法，其特征在于：通过对非小细胞肺癌培美曲塞A549/PEM耐药细胞株中的差异表达蛋白的研究来实现非小细胞肺癌对培美曲塞耐药性的研究。

进一步的，非小细胞肺癌培美曲塞A549/PEM耐药细胞株中的差异表达蛋白的研究具体包括以下步骤，

S1：非小细胞肺癌培美曲塞A549/PEM耐药细胞株的构建及鉴定；

S2：利用iTRAQ技术分析A549/PEM耐药细胞株中的差异表达蛋白；

S3：从步骤S2分析得到的差异表达蛋白中筛选出若干个兴趣蛋白进行PRM验证；

S4：对步骤S3中经过验证的兴趣蛋白进行分析，进一步的筛选出两个目标差异蛋白进行药物敏感性研究。

进一步的，步骤S1的具体操作包括，

S11、细胞培养：将非小细胞肺癌的亲本细胞株A549培养在含10％胎牛血清，100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素的RPMI-1640培养基中，置于37℃，5％CO₂的恒温培养箱中孵育；

S12、NSCLC亲本细胞株A549的IC50值测定：

S13：采用高浓度反复间歇诱导法，构建PEM耐药NSCLC细胞株A549/PEM；

S14：A549/PEM耐药细胞株耐药指数的测定。

进一步的，步骤S12的具体操作包括，