[发明专利]一种利用诱导多能干细胞构建妊娠期致流产药物筛查模型的方法及应用有效
| 申请号： | 202011378291.X | 申请日： | 2020-11-30 |
| 公开（公告）号： | CN112410286B | 公开（公告）日： | 2023-10-27 |
| 发明（设计）人： | 毋姗姗;邓锦波;赵良;范文娟;王艳丽;位婷婷 | 申请（专利权）人： | 河南省生殖健康科学技术研究院（河南省出生缺陷干预工程技术研究中心） |
| 主分类号： | C12N5/073 | 分类号： | C12N5/073;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 郑州芝麻知识产权代理事务所(普通合伙) 41173 | 代理人： | 张海青 |
| 地址： | 450002 河*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 诱导 多能 干细胞 构建 妊娠期 流产 药物 模型 方法 应用 | ||
1.一种利用诱导多能干细胞构建妊娠期致流产药物筛查模型的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)拟胚体的培养：通过三维悬浮培养的方式对人诱导多能干细胞进行培养，形成拟胚体；
2)施加待筛选药物；
3)通过分析拟胚体发育的指标筛选和/或评价所述药物。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)中拟胚体的培养，具体步骤为：
S1.通过将外源因子组合OCT4、SOX2和KLF2导入正常人的尿上皮细胞重新编程获得诱导多能干细胞；
S2.将步骤(1)中的诱导多能干细胞转移至无饲养层的培养基中，培养4～5天后，用EDTA消化液消化；
S3.将步骤(2)中消化后的细胞转移至含y-27632诱导因子的拟胚体培养基进行悬浮培养，细胞浓度为1×104～1×105cell/mL；
S4.次日，添加不含y-27632诱导因子的拟胚体培养基，每日半量换液；
S5.体外培养3～4天，即得拟胚体。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)培养基为无血清STEMdiffTM，并以Matrigel为基质。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)为将步骤1)得到的拟胚体继续培养2天后，移入含有待筛选药物的拟胚体培养基中。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤3)中拟胚体发育指标包括拟胚体直径大小变化、拟胚体内部细胞凋亡变化、拟胚体胚层发育水平。
6.如权利要求1至5任一项所述方法在妊娠期致流产药物筛查中的应用。
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