[发明专利]一种可检测猪旋毛虫早期感染的荧光免疫层析试纸条及其制备方法

权利要求书

1.一种旋毛虫病荧光免疫层析检测试纸条，包括样品垫、结合垫、层析膜、吸水垫和底板，其特征在于，所述样品垫设有加样孔；所述结合垫喷涂有荧光探针，所述荧光探针包括作为指示探针的时间分辨荧光微球偶联山羊抗兔IgG和作为捕获探针的时间分辨荧光微球偶联旋毛虫ES混合抗原；所述层析膜上设有检测线和质控线，其中，检测线上喷涂有鼠抗猪IgG，质控线上喷涂有兔抗山羊IgG。

2.根据权利要求1所述的旋毛虫病荧光免疫层析检测试纸条，其特征在于，所述旋毛虫ES混合抗原由旋毛虫肌幼虫排泄分泌物ML-ESP抗原与旋毛虫肠道期肌幼虫排泄分泌物iML-ESP抗原组成。

3.根据权利要求1所述的旋毛虫病荧光免疫层析检测试纸条，其特征在于，所述时间分辨荧光微球为Eu纳米颗粒；所述样品垫材质为玻璃纤维素膜XQ-Y8；所述结合垫材质为玻璃纤维素膜SB-06；所述层析膜材质为硝酸纤维素膜Millipore135。

4.权利要求1所述的旋毛虫病荧光免疫层析检测试纸条的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)旋毛虫ES混合抗原制备：将旋毛虫肌幼虫排泄分泌物ML-ESP抗原及旋毛虫肠道期肌幼虫排泄分泌物iML-ESP抗原，按照1:1-3:1的质量比混合，获得旋毛虫ES混合抗原；

2)结合垫的制备：将时间分辨荧光微球偶联旋毛虫ES混合抗原荧光探针和时间分辨荧光微球偶联山羊抗兔IgG荧光探针按照10:1-5:1的质量比喷涂于结合垫上，真空抽干后干燥保存备用；

3)检测线和质控线的制备：将鼠抗猪IgG抗体与兔抗山羊IgG抗体按照2:1的质量比，分别喷涂在层析膜上，形成检测线与质控线，真空干燥2-3h，密封保存备用；

4)试纸条的组装：在底板上沿样品检测时的层析方向依次将样品垫、结合垫、层析垫、吸水垫粘贴在底板上，制成试纸条。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤1)所述旋毛虫肌幼虫排泄分泌物ML-ESP抗原的制备方法如下：将旋毛虫肌幼虫用含有青霉素和链霉素的培养液洗涤后自然沉淀20-30min，然后将其放入含终浓度250U/mL青霉素和终浓度为250U/mL链霉素的培养液中，密度为3000-5000条/mL，37℃，10％二氧化碳，培养18-24h后收集上清，收集的上清依次经透析及3KDa超滤管浓缩后即为旋毛虫肌幼虫排泄分泌物ML-ESP抗原。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤1)所述旋毛虫肠道期肌幼虫排泄分泌物iML-ESP抗原的制备方法如下：将旋毛虫肌幼虫经口感染大鼠，感染剂量为8000条/只，6h后处死，取出大鼠小肠，切割成碎片，放置于含有培养液的培养皿筛网上，37℃孵育2-3h，收集培养皿底部的虫体，用含有青霉素和链霉素的培养液洗涤后自然沉淀20-30min，然后将其放入含终浓度250U/mL青霉素和终浓度为250U/mL链霉素的培养液中，密度为3000-5000条/mL，37℃，10％二氧化碳，培养18-24h后收集上清，收集的上清依次经透析及3KDa超滤管浓缩后即为旋毛虫肠道期肌幼虫排泄分泌物iML-ESP抗原。