[发明专利]一种可检测猪旋毛虫早期感染的荧光免疫层析试纸条及其制备方法

说明书

一种可检测猪旋毛虫早期感染的荧光免疫层析试纸条及其制备方法，属于血清学检测技术领域。为了更快速、方便、灵敏地检测旋毛虫感染，本发明所述的试纸条，包括样品垫、结合垫、层析膜、吸水垫和底板，所述结合垫喷涂有荧光探针，所述荧光探针包括作为指示探针的时间分辨荧光微球偶联山羊抗兔IgG和作为捕获探针的时间分辨荧光微球偶联旋毛虫ES混合抗原，所述旋毛虫ES混合抗原由旋毛虫肌幼虫排泄分泌物ML‑ESP抗原与旋毛虫肠道期肌幼虫排泄分泌物iML‑ESP抗原组成；所述层析膜上设有检测线和质控线，其中，检测线上喷涂有鼠抗猪IgG，质控线上喷涂有兔抗山羊IgG。本发明可用于旋毛虫现场快速检测。

技术领域

本发明属于血清学检测技术领域，具体涉及一种可检测猪旋毛虫早期感染的荧光免疫层析试纸条及其制备方法。

背景技术

旋毛虫引起的旋毛虫病是一种重要的人兽共患寄生虫病，其可感染150多种食肉动物和杂食动物，人主要因为生食或半生食含有旋毛虫肌幼虫的肉及肉类产品而感染，同时只有人感染才表现出明显的临床症状。据旋毛虫国际委员会报道：在1986-2009年期间，全球共计有65818例旋毛虫感染事件发生。同时，据相关文献报道，1964-2011年期间，我国共计有38794例旋毛虫感染事件发生，其中有336例患者不幸死亡。因此我国已成为受旋毛虫病侵袭的主要国家之一。鉴于上述严重情况，我国每年花费22亿元用来阻断和防控旋毛虫病。我国从古至今都有喜食猪肉的风俗，而猪作为旋毛虫的中间宿主，在旋毛虫病的传播方面起到了一定作用。

目前旋毛虫的检测方法分为直接检测法和间接检测法。直接检测法即人工消化法，也是检测旋毛虫病的金标准检测方法。而间接检测法应用的是基于肌幼虫排泄分泌产物(ML-ES)抗原的ELISA法和胶体金免疫层析法。而上述方法存在费时费力、检测仪器昂贵、灵敏度低的弊端。因此，为确保食品安全和稳定畜牧业经济增长，亟待研制一种旋毛虫病的现场快速检测方法。

荧光微球免疫层析试纸条是近年来兴起的一种快速灵敏的检测方法。荧光微球斯托克斯位移长、荧光猝灭时间长的优点使得其在灵敏度方面与胶体金免疫层析技术有了较大的提高，且该技术已经成功应用于环境卫生、食品安全、化学药物残留的检测工作之中。作为现有技术的申请号为201910604044.8的专利，提供了一种旋毛虫病荧光免疫层析检测试纸条，这种试纸条包括样品垫、结合垫、层析膜、吸水垫和底板，所述结合垫上标记有时间分辨荧光微球偶联山羊抗猪IgG；所述层析膜上设有检测线与质控线，其中检测线上喷涂由旋毛虫肌幼虫排泄分泌物ML-ESP抗原与旋毛虫肠道期肌幼虫排泄物分泌物iMP-ESP抗原组成的旋毛虫肌幼虫ES混合抗原；所述质控线上喷涂有兔抗山羊IgG，这种试纸条与OIE规定的ES ELISA方法相比虽然能够在旋毛虫感染后的更早期准确地检测出旋毛虫抗体阳性，缩短检测的“窗口”期，但是该试纸条能够检测出旋毛虫抗体阳性的最早的时间点距旋毛虫发育成具有感染能力的感染性幼虫还有一段时间，因此该技术有待进一步改进。

发明内容

为解决旋毛虫病的现场检测难题，并提高旋毛虫试纸条检测的灵敏度及特异性，本发明提供了一种可检测猪旋毛虫早期感染的荧光免疫层析试纸条及其制备方法，该试纸条包括样品垫、结合垫、层析膜、吸水垫和底板，所述样品垫设有加样孔；所述结合垫喷涂有荧光探针，所述荧光探针包括作为指示探针的时间分辨荧光微球偶联山羊抗兔IgG和作为捕获探针的时间分辨荧光微球偶联旋毛虫ES混合抗原；所述层析膜上设有检测线和质控线，其中，检测线上喷涂有鼠抗猪IgG，质控线上喷涂有兔抗山羊IgG。

进一步地限定，所述旋毛虫ES混合抗原由旋毛虫肌幼虫排泄分泌物ML-ESP抗原与旋毛虫肠道期肌幼虫排泄分泌物iML-ESP抗原组成。

进一步地限定，所述时间分辨荧光微球为Eu纳米颗粒；所述样品垫材质为玻璃纤维素膜XQ-Y8；所述结合垫材质为玻璃纤维素膜SB-06；所述层析膜材质为硝酸纤维素膜Millipore135。

本发明还提供了一种可早期检测猪旋毛虫感染的荧光免疫层析试纸条的制备方法，所述方法包括如下步骤：