[发明专利]核苷类衍生物改性的核酸适体R50

说明书

本发明涉及一种核苷类衍生物改性的核酸适体，其序列包括如SEQ NO:1所示的序列，所述核酸适体的至少一个核苷酸由核苷类衍生物替换，和/或末端经核苷类衍生物连接修饰；优选地，所述的核苷类衍生物为胸腺嘧啶核苷衍生物或胞嘧啶核苷衍生物。

技术领域

本发明属于生物技术和遗传工程技术领域，具体涉及一种核酸适体，其由核苷类衍生物改性，用于改善其稳定性，增加其成药性，以及改善其在体内应用时半衰期短以及肾清除等问题。

背景技术

核酸适体

核酸适体是一段单链的DNA或RNA，通常通过筛选(指数富集配体进化技术,SELEX)的方法得到，与配体具有强的亲和力和特异性[1,2]。当前已有数百条基于各种靶标的核酸适体，如器官、细胞、组织、蛋白、小分子等等。其中基于肿瘤细胞和肿瘤相关蛋白的也有上百条[3]。目前有很多核酸适体已经处于临床研究阶段，但FDA批准上市的目前只有一条靶向VEGF，用于老年黄斑性病变的核酸适体[4]。稳定性和快速肾清除是核酸适体应用中的主要问题。

核酸适体的改性

当前核酸适体的改造方法有很多，主要包括末端修饰、糖环修饰、磷酸二酯键修饰、碱基修饰、镜像修饰、环化修饰、二聚化、多聚化修饰等。其中末端修饰包括生物素/荧光素等修饰，胆固醇/脂肪链修饰，PEG修饰等。糖环修饰包括2位置换，4位置换等，锁核酸等。磷酸二酯键的修饰包括磷酸化/甲基化修饰，三唑改性等。当前临床实验阶段的核酸适体往往采用多种修饰相结合的方式，如当前FDA批准的核酸适体Macuge进行了碱基2位F代修饰,末端倒T修饰，末端PEG修饰等[5]。

药物碱基

目前药物碱基有两种类型,一种是在原有碱基的基础上修饰药物,构成的药物碱基,另一种是将药物合成碱基类似物方便固相合成连接。如5-FU(5氟脲嘧啶)，是尿嘧啶5位上的氢被氟取代；吉西他滨是在糖环上进行氟代修饰，形成了胞嘧啶的类似物。而后有文献报道将药物构建成碱基类似物从而固相合成至DNA链上。

核酸适体连接药物碱基后使核酸适体本身有了药物活性，而药物则有了核酸适体的靶向性。根据目前文献的报道，药物碱基并不影响核酸适体的结合能力和亲和力[6,7]。

核酸适体R50

核酸适体R50是2012年筛选得到[8]。本专利拟通过药物碱基的修饰改善其稳定性，增加其成药性，改善其在体内应用半衰期短及肾清除等问题。

参考文献：

[1]Craig Tuerk,Larry Gold.Science,1990,249,505-510.

[2]Andrew D Ellingtom,Jack W.Szostak.Nature,1990,346,818-822.

[3]Parashar,Abhishek.Journal of Clinical and Diagnostic Research.2016

[4]Keith E Maier and Matthew Levy.Molecular Therapy MethodsClinicalDevelopment.2016,5,16014

[5]Jayeeta Banerjee.Marit N Hamilton.J Mol Med 2013.

[6]Sorah Yoon,Jhon J.Rossi,el al.Mol Ther Nucleic Acids,2017,6,80-88.

[7]Sven Kruspe,Ulrich Hahn,2014,9,1998-2011.