[发明专利]一种检测MMP-14的电化学发光生物传感器及其制备方法

权利要求书

1.一种检测MMP-14的电化学发光生物传感器的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1，制备基底材料C₆₀-Chit；

步骤1.1，将C₆₀分散于超纯水中，超声后得到C₆₀水溶液；

步骤1.2，将壳聚糖溶解于醋酸溶液中，搅拌后得到胶状壳聚糖溶液；

步骤1.3，将C₆₀水溶液与壳聚糖溶液混合搅拌后得到基底材料C₆₀-Chit；

步骤2，配置MMP-14特异性识别探针；

步骤2.1，将多肽抑制剂溶解于Tris-HCl缓冲液中，得到MMP-14特异性识别的探针溶液，其中，多肽抑制剂Ap1的氨基酸序列为：GYPKSALR-Ahx-(EG)₃-Cys；

步骤3，电化学发光生物传感器的组装；

步骤3.1，将C₆₀-Chit滴加到玻碳电极表面待其自然晾干，得到C₆₀-Chit/GCE电极；

步骤3.2，将GA滴加到C₆₀-Chit/GCE电极表面进行交联,然后用Tris-HCl缓冲溶液冲洗，得到GA/C₆₀-Chit/GCE电极,其中GA为戊二醛；

步骤3.3，将MMP-14特异性识别的探针溶液滴加到GA/C₆₀-Chit/GCE电极表面进行交联，然后用Tris-HCl缓冲溶液冲洗，得到Ap1/GA/C₆₀-Chit/GCE电极；

步骤3.4，将BSA滴加到Ap1/GA/C₆₀-Chit/GCE电极表面进行封闭，封闭后用Tris-HCl缓冲溶液冲洗电极表面；

步骤3.5，制备信号探针，第二多肽抑制剂Ap2端头的氨基与双(联吡啶)-4′-甲基-4羰基吡啶钌-N-琥珀酰亚胺酯双六氟磷酸酯(Ru)进行酰胺化反应合成信号探针Ap2-Ru；当MMP-14通过与Ap1同源二聚化结合到电极表面时，通过与Ap2异源二聚化将信号探针Ap2-Ru结合到电极表面。

2.根据权利要求1所述的检测MMP-14的电化学发光生物传感器的制备方法，其特征在于，步骤1.1中，C₆₀的质量浓度为0.2-2mg/mL，超声时间为20-30min。

3.根据权利要求1所述的检测MMP-14的电化学发光生物传感器的制备方法，其特征在于，步骤1.2中，壳聚糖的质量浓度为0.5％，醋酸溶液的体积浓度为0.1％。

4.根据权利要求1所述的检测MMP-14的电化学发光生物传感器的制备方法，其特征在于，步骤1.3中，C₆₀水溶液与壳聚糖溶液混合时体积比为1:1，搅拌时间为40-60min。

5.根据权利要求1所述的检测MMP-14的电化学发光生物传感器的制备方法，其特征在于，步骤3.1中，C₆₀-Chit的质量浓度为0.1-1mg/mL。

6.根据权利要求1所述的检测MMP-14的电化学发光生物传感器的制备方法，其特征在于，步骤3.2中，GA溶液的质量浓度为5％，交联时间为3-4h。

7.根据权利要求1所述的检测MMP-14的电化学发光生物传感器的制备方法，其特征在于，步骤3.3中，Ap1的浓度为3-50μM，交联时间为12-15h。

8.根据权利要求1所述的检测MMP-14的电化学发光生物传感器的制备方法，其特征在于，步骤3.4中，BSA质量浓度为0.5％-1％，封闭时间为30-60min。

9.一种检测MMP-14的电化学发生传感器，其特征在于，由权利要求1-8任一项所述的制备方法制得。