[发明专利]一种检测MMP-14的电化学发光生物传感器及其制备方法

说明书

本发明属于一种检测肿瘤标记物MMP‑14的电化学发光生物传感器及其制备方法，本发明得到的检测MMP‑14的电化学发光生物传感器，当传感器与MMP‑14相互作用后，MMP‑14因与Ap1发生同源二聚而结合到电极表面后可以通过与Ap2异源二聚化将信号探针Ap2‑Ru结合到电极表面，随着MMP‑14浓度增大，结合到电极表面的Ap2‑Ru浓度增大，电化学发光信号增强，基于此实现对MMP‑14高选择性和高灵敏度检测；具有灵敏度高、选择性高、稳定性高、成本低廉等优点。

技术领域

本发明属于医疗器械领域，涉及一种检测MMP-14的电化学发光生物传感器及其制备方法。

背景技术

截至目前，癌症仍然是世界范围内最严重的致死原因。尽管人们竭尽全力开发新的检测和治疗方法，但仍有90％的患者死于癌细胞扩散引起的全身性疾病。据报道，基质金属蛋白酶(MMPs)参与了多种癌细胞转移、侵袭过程，且有研究表明某一种MMP的高表达与特定癌症的发病率呈正相关，说明MMPs可能可以作为多种疾病的检测标志物及治疗靶点。因此，研发灵敏且精确的MMPs传感技术对于癌症的临床诊断及治疗具有重要意义。

目前报道了很多基于MMPs催化结构域(CAT)中筛选的MMPs特异性多肽的水解断裂建立的荧光或电化学发光生物传感技术用于对MMP-9,MMP-2,MMP-3和MMP-7进行定量检测。但是，肽裂解片段与荧光分子或电活性分子结合段往往会产生非特异性吸附，从而产生假阳性信号。而且，这些传感器受检测原理限制往往是Signal OFF型，很可能由于固定不牢固导致信号分子脱落产生假信号，这些因素均会对传感器的检测灵敏度造成影响。所以，上述生物传感技术因缺乏特异性，在临床上难以应用于检测活性位点导向的MMPs。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供一种检测MMP-14的电化学发光生物传感器及其制备方法，能对MMP-14进行即时检测，特异性强。

本发明是通过以下技术方案来实现：

一种检测MMP-14的电化学发光生物传感器的制备方法，包括如下步骤：

步骤1，制备基底材料C₆₀-Chit

步骤1.1，将C₆₀分散于超纯水中，超声后得到C₆₀水溶液；

步骤1.2，将壳聚糖溶解于醋酸溶液中，搅拌后得到胶状壳聚糖溶液；

步骤1.3，将C₆₀水溶液与壳聚糖溶液混合搅拌后得到基底材料C₆₀-Chit；

步骤2，配置MMP-14特异性识别探针

步骤2.1，将多肽抑制剂溶解于Tris-HCl缓冲液中，得到MMP-14特异性识别的探针溶液，其中，多肽抑制剂的氨基酸序列为：GYPKSALR-Ahx-(EG)₃-Cys(Ap1)；

步骤3，电化学发光生物传感器的组装

步骤3.1，将C₆₀-Chit滴加到玻碳电极表面待其自然晾干，得到C₆₀-Chit/GCE电极；

步骤3.2，将GA滴加到C₆₀-Chit/GCE电极表面进行交联,然后用Tris-HCl缓冲溶液冲洗，得到GA/C₆₀-Chit/GCE电极；

步骤3.3，将Ap1滴加到GA/C₆₀-Chit/GCE电极表面进行交联，然后用Tris-HCl缓冲溶液冲洗，得到Ap1/GA/C₆₀-Chit/GCE电极；