[发明专利]一种单管同时检测2019-nCov病毒Orf1ab、E及N区域的引物和方法

说明书

本发明提供了2019‑nCov或SARS‑Cov‑2病毒核酸检测的引物、探针和检测方法，扩增覆盖2019‑nCov病毒核酸的Orf1ab、E及N三个区域，上下游引物和探针以及检测内标基因Rnase P用上下游引物和探针。对所述四条探针采用不同的荧光基团标记，通过条件优化可实现在一管内完成所有检测，大大节省了检测成本和检测时间。所述检测试剂和方法检测特异性好，灵敏度高，操作简便，可实现对2019‑nCov或SARS‑Cov‑2病毒进行快速、准确的检测。

技术领域

本发明属于生命科学和生物技术领域，是一种用于检测2019-nCov或 SARS-Cov-2病毒核酸的试剂盒。

背景技术

冠状病毒在系统分类上属冠状病毒科冠状病毒属。冠状病毒属的病毒是具有 外套膜的正链单股RNA病毒，直径约80-120nm，呈球形或椭圆形，具多形性。 病毒有包膜，包膜上有棘突，整个病毒像日冕。冠状病毒除人类以外还可感染猪、 牛、猫等多种哺乳动物及鸟类。冠状病毒引起的人类疾病主要是呼吸系统感染和 肠道感染，一般症状轻微，但有两种可引起严重呼吸系统疾病，包括严重急性呼 吸综合征冠状病毒(Severe AcuteRespiratory Syndrome Coronavirus，SARS-CoV) 和中东呼吸综合征冠状病毒(MiddleEast Respiratory Syndrome Coronavirus, MERS-CoV)。

2019新型冠状病毒病，于2020年1月12日被世界卫生组织(WHO)暂命 名为“2019-nCoV”。新冠患者会出现程度不同的症状，以发热、乏力、干咳、 气促为主，少数患者伴有鼻塞、流涕和腹泻等症状。轻症患者只是发烧或轻微咳 嗽，而重症患者多在一周后出现呼吸困难和/或低氧血症，严重者快速进展为急 性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克及多器官功能衰竭等，甚至死亡。该病毒致死率 约为2％到4％，但这是早期的流行病调查结果，随着更多信息的获得可能会改 变。

新型冠状病毒主要的传播途径是呼吸道飞沫传播和接触传播。人群普遍易 感，但免疫功能较差的人群，如老年人、孕产妇、肝肾功能异常及有慢性病的人 群感染后病情更严重。

新冠确诊依赖于病原学或血清检查。血清新冠病毒特异性IgM和IgG抗体 检测，该方法具有简便、快速、安全且成本低等优势，但其检测有一定滞后性， 对潜伏期感染人群检测准确性低且该方法容易受血液标本中的其他物质干扰引 起假阳性。核酸检测是检测病毒感染的病原学“金标准”，病毒基因测序特异性 高，但费时费力且容易出现假阴性导致漏诊。本项目采用Taqman探针法荧光定 量PCR检测新冠病毒核酸，并加入内标进行质量控制，具有灵敏度高，特异性 好，快速准确等优势。

本项目采用荧光定量PCR法对2019-nCoV病毒核酸进行检测，对临床疑似 病例可辅助确诊，对潜伏期病例及无症状感染者可进行筛选，对2019-nCoV病 毒感染患者的早诊断、早隔离、早治疗可发挥重要作用。

发明内容

本发明提供了一种实时荧光定量PCR法检测2019-nCov或SARS-Cov-2病 毒的引物和探针，所述引物和探针序列包括扩增覆盖2019-nCov病毒核酸的 Orf1ab、E及N三个区域的上下游引物和探针，分别是Orf1ab-F、Orf1ab-R、 Orf1ab-Probe；E-F、E-R、E-Probe；N-F、N-R、N-Probe；检测内标基因Rnase P 用上下游引物和探针分别是Rnase P-F、Rnase P-R、Rnase P-Probe；其碱基序列 为：

orflab-F：5'-TGAGTGAAATGGTCATGTGTGG-3'；

orflab-Pro：5’-FAM-CAGGTGGAACCTCATCAGGAGATGC-BHQ1-3’；