[发明专利]一种高密度液体酿酒酵母的制作方法

权利要求书

1.一种高密度液体酿酒酵母的制作方法，其特征在于，所述制作方法包括实验室扩培、液体酵母的工厂扩培、液体酵母的存储和运输；具体包括以下步骤：

步骤一：从甘油培养基中选取生长良好的菌株进行种子培养，经过三次扩培后运送至生产车间；

步骤二：对酵母转移罐出口和扩培罐入口进行消毒，在扩培罐培养后进行取样监测；

步骤三：测定酵母密度和活性均合格后灌装在无菌容器中，密封观察鼓起情况，运输前将上清液换成无菌生理盐水，置于保温容器中冷链运输。

2.根据权利要求1所述的高密度液体酿酒酵母的制作方法，其特征在于，所述步骤一中从-80℃10％甘油培养基中取出酵母菌株，用无菌接种环挑去少量菌液在酵母琼脂培养基上划线，22℃培养40-48小时，选取生长良好的菌落用于种子培养液。

3.根据权利要求1所述的高密度液体酿酒酵母的制作方法，其特征在于，所述实验室扩培中第一次扩培取5-10个生长良好的菌落于15mL酵母液体培养基，22℃，200rpm摇床培养40-48小时。

4.根据权利要求1所述的高密度液体酿酒酵母的制作方法，其特征在于，所述实验室扩培中，一次扩培后，当OD达到2-2.2之间时进行二次扩培，将15mL培养物接种于200mL酵母液体培养基扩大培养，将培养烧瓶置于磁力搅拌器上，调节速度至200rpm。培养40-48小时。

5.根据权利要求1所述的高密度液体酿酒酵母的制作方法，其特征在于，所述实验室扩培中二次扩培后，当OD达到2-2.2之间时进行三次扩培，将200mL培养物接种于5000mL酵母液体培养基扩大培养，将培养烧瓶置于磁力搅拌器上，调节速度至200rpm，培养40-48小时。

6.根据权利要求1所述的高密度液体酿酒酵母的制作方法，其特征在于，所述步骤二中消毒过程包括酵母扩培罐中煮沸消毒酵母液体培养基，冷却至22℃；用酒精消毒酵母转移罐输出口和扩培罐酵母入口，用无菌软管连接酵母转移罐输出口和扩培罐酵母入口，用无菌气泵将酵母注入酵母扩培罐。

7.根据权利要求1所述的高密度液体酿酒酵母的制作方法，其特征在于，所述扩培罐培养时搅拌器120rmp，并通入无菌空气，调节进气量为6L/min/200L培养基，压0.1mP。

8.根据权利要求1所述的高密度液体酿酒酵母的制作方法，其特征在于，所述取样监测项目包括取样监测酵母数、pH值、糖度、肠道致病菌、金葡菌、乳酸菌，每8小时一次。