[发明专利]一种酸性α淀粉酶及其制备方法与应用

说明书

一种酸性α淀粉酶及其制备方法与应用，属于生物工程技术领域。所述酸性α淀粉酶的核苷酸序列如SEQ ID NO 1，氨基酸序列如SEQ ID NO 2。酸性α淀粉酶的制备方法：1)设计并合成扩增酸性α淀粉酶基因的引物；2)PCR扩增及重组质粒的构建；3)α淀粉酶的表达与纯化所述酸性α酶可在纺织、造纸、洗涤剂、发酵和食品工业中的应用。所述α淀粉酶具有较广的pH与温度适用范围，不仅能用于淀粉糖化、生产高麦芽糖浆、生产高葡萄糖浆等淀粉加工工业，同时由于其在高温酸性条件下具有较高的酶活，还可在洗涤剂工业、医疗、食品和饲料加工方面进行应用，从而拓宽α淀粉酶在工业生产中的应用范围。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，尤其是涉及采用基因工程手段的一种酸性α淀粉酶及其制备方法与应用。

背景技术

淀粉酶是催化淀粉和糖原水解产生多种产物的酶类总称，包括糊精、低聚糖、麦芽糖和少量葡萄糖等。基于酶促反应产生的糖的异构体类型，淀粉酶可以分为α-淀粉酶和β-淀粉酶；其中，α-淀粉酶属于内切型淀粉酶，可通过在随机位点切割α-1,4-葡萄糖苷键来分解长链碳水化合物。近年来，淀粉酶已完全取代了淀粉转化工业中用于淀粉水解的化学物质，并在酶中占有主要市场份额。具有优异性能的新型淀粉酶，特别是高温条件下具有稳定活性的酸性淀粉酶的发现，一直是科学和商业研究的重点。

酸性α-淀粉酶有别于中性α-淀粉酶，在低pH条件下仍然具有较好的酸稳定性。酸性α-淀粉酶是淀粉深加工业的福音，具有节约原材料，减少劳动力消耗和废弃物排放，简化加工工艺等优点。目前已有研究报道表示，大规模生产酸性α-淀粉酶的菌株多数均来自于微生物，曲霉和芽孢杆菌由于发酵周期相对较短，现被工业广泛使用。目前国内企业酸性α-淀粉酶的生产水平和应用性与国际领先水平仍具有很大的差距，国内一些商业化的酸性α-淀粉酶也大多数进口自国外企业。因此，产量多、活性好的酸性α-淀粉酶菌株的获得与对其酶活性质的改进，提高其耐酸性能等，对于酸性α-淀粉酶的商业化应用以及我国酶制剂的发展具有十分重要的意义。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术存在的上述不足，提供一种酸性α淀粉酶及其制备方法及产品。

所述酸性α淀粉酶的核苷酸序列如SEQ ID NO 1。

所述酸性α淀粉酶的氨基酸序列如SEQ ID NO 2。

所述酸性α淀粉酶的最适温度为50℃，最适pH为5.0，最适盐度为0.5％NaCl,在酸性条件下具有较高的活性和良好的稳定性。

所述一种酸性α淀粉酶的制备方法，包括以下步骤：

1)设计并合成扩增酸性α淀粉酶基因的引物，其序列如下：

上游引物Amy2863F：

5’-GTGCCGCGCGGCAGCCATATGAGGCTCACCGACACCAGCG-3’

下游引物Amy2863R：

5’-TTGTCGACGGAGCTCGAATTCTCAGGCGATCCGCCGCTC-3’

2)PCR扩增及重组质粒的构建：

用Amy2863F和Amy2863R引物，以Microbacterium hydrothermale MCCC 1A05925的基因组DNA为模板进行扩增；PCR扩增的产物与经限制性内切酶Nde I和EcoR I酶切后pET-28a表达载体连接，将连接产物转化至大肠杆菌，PCR产物经限制性内切酶Nde I和EcoRI酶切后被连接到经同样限制性内切酶酶切的表达载体pET-28a上，将连接产物转化大肠杆菌E.coli DH5α，筛选含有α淀粉酶基因的重组质粒，并进行核酸电泳和测序验证。

3)α淀粉酶的表达与纯化