[发明专利]测定人体胃泌素G17含量的磁微粒化学发光检测试剂盒

权利要求书

1.一种测定人体胃泌素G17含量的磁微粒化学发光检测试剂盒，包括：磁分离试剂、R1试剂、R2试剂、校准品液系列和化学发光底物液；R2试剂为碱性磷酸酶标记的胃泌素G17单克隆抗体稀释液，化学发光底物液为碱性磷酸酶催化发光的底物液，R1试剂为样品稀释液，校准品液系列为含有不同浓度胃泌素G17抗原的稀释液；其特征在于，所述磁分离试剂为包被胃泌素G17单克隆抗体的免疫磁珠，

所述包被胃泌素G17单克隆抗体的免疫磁珠包被方法是：

(1)洗涤磁珠：取100mg/mL的磁珠100uL，加入0.1M的MES缓冲液1mL，混匀5分钟，磁分离，去上清，重复洗涤3次；

(2)活化：取洗涤完成的磁珠，加入20mg/mL、50uL EDC溶液及20mg/mL、50ulNHS溶液，充分混匀，室温振荡反应2h；

(3)活化后洗涤：反应结束后，磁分离，去上清，用MES溶液重悬洗涤3次；

(4)包被：向洗涤完成的磁珠中加入用0.05M硼酸缓冲液稀释后的胃泌素G17单克隆抗体，充分混匀，37℃摇床孵育18h；

(5)封闭：将孵育后的磁珠磁分离，去上清，加入1mL封闭液，混匀5分钟，磁分离，去上清，重复洗涤3次，得到包被胃泌素G17单克隆抗体的免疫磁珠，浓度为10mg/mL；

(6)定容：用封闭液最终定容到10mL，浓度为1mg/mL，置于2-8℃平衡24h，得到胃泌素G17单克隆抗体包被的磁分离试剂；

所述封闭液为pH值为7.0～8.0，包括：PBS，浓度为0.02M；摩尔浓度为1M的氯化镁溶液；摩尔浓度为0.1M的氯化锌；牛血清白蛋白，浓度为10.0～50.0g/L；蔗糖，浓度为20.0～100.0g/L；Proclin300，浓度为1.05～4.20g/L；Bronidox，浓度为1.05～4.20g/L；其余组分为去离子水。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述封闭液中还包括浓度为10.0～20.0g/L的甘油。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述封闭液pH值为7.4，包括：PBS，浓度为0.02M；摩尔浓度为1M的氯化镁溶液；摩尔浓度为0.1M的氯化锌；牛血清白蛋白，浓度为10.0g/L；蔗糖，浓度为100.0g/L；甘油，浓度为20.0g/L；Proclin300，浓度为2.1g/L；Bronidox，浓度为2.1g/L；其余组分为去离子水。

4.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述R1试剂为含阻断剂的样品稀释液，pH值为5.8～8.5，包括：Tris，浓度为5.98～6.52g/L；Proclin-300，浓度为0.98～1.99g/L；氯化钠，浓度为8.5～9.5g/L；牛血清白蛋白，浓度为10～30g/L；EDTA-2Na，浓度为1～10g/L；阻断剂，浓度为50～200ug/mL；其余为去离子水；

优选地，所述R1试剂为含阻断剂的样品稀释液，pH值为7.4，包括：Tris，浓度为6.05g/L；Proclin-300，浓度为1.99g/L；氯化钠，浓度为9g/L；牛血清白蛋白，浓度为10g/L；EDTA-2Na，浓度为2g/L；阻断剂，浓度为100ug/mL；其余为去离子水。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述R2试剂即碱性磷酸酶标记的胃泌素G17单克隆抗体稀释液是由用SMCC活化的碱性磷酸酶与2-亚氨基硫烷盐酸盐活化的胃泌素G17单克隆抗体按照摩尔比混合均匀进行偶联反应后，使用Tris缓冲液平衡，凝胶柱进行不同分子大小片段的分离纯化，制得碱性磷酸酶标记的胃泌素G17标记抗体。