[发明专利]一种同时测定血浆中维生素A、维生素E和25-羟基维生素D的方法

说明书

本发明提供了一种同时测定血浆中维生素A、维生素E和25‑羟基维生素D的方法，采用液相色谱串联质谱法进行检测,检测的色谱条件如下：色谱柱：F5色谱柱；流动相：流动相A为含体积分数为0.1%甲酸和1mM甲酸铵的甲醇溶液；B为体积分数为0.1%的甲酸水溶液；梯度洗脱程序为：0‑2.7min，78%A；2.71‑4.00min，97%A，4.01‑4.8min，78%A。本发明方法高效准确、线性范围广、重现性良好，而且样本使用量少、患者依从性好、检测成本低，具有良好的临床应用前景。

技术领域

本发明属于分析检测领域，具体涉及一种同时测定血浆中维生素A、维生素E和25-羟基维生素D的方法。

背景技术

维生素又名维他命，是维持人体生命活动必须的微量营养物质。维生素种类多、性质差异悬殊，按溶解性可分为脂溶性和水溶性两大类，脂溶性维生素包括维生素A、D、E等，其缺乏会导致营养性疾病的发生。

例如，维生素A是构成视觉细胞中感受弱光的视紫红质的组成成分，缺乏时影响暗适应能力，会导致夜盲症、眼部炎症等。维生素D能够调节人体的钙、磷体内平衡，缺乏会导致少儿佝偻病和成年人的软骨病。25羟基维生素D是维生素D在体内的主要存在形式，其中，3-epi-25-(OH)-VD3是 25(OH)VD3的同分异构体，但不具有生理活性，检测过程中若不能有效分离该物质，将造成25(OH)VD3的检测结果偏高。维生素E具有抗氧化、免疫调节、控制炎症、基因表达和认知能力的调控等作用,缺乏会导致代谢失常、免疫力下降、新生儿溶血性贫血等。

脂溶性维生素的传统检测方法有比色法、紫外失活分光光度法、荧光法及微生物法等。这些方法只能测定某一种维生素的含量，操作步骤复杂，血浆样本量大,且结果不稳定,干扰因素多,因此需要建立一种灵敏、准确、快速的分析方法。

现有技术中，有使用液相色谱-串联质谱(LS-MS/MS)同时测定多种脂溶性维生素的报道，如李金蓉等，液质联用定量血清中维生素D、A、E的方法，国际检验医学杂志，2019,40:876-881报道了一种定量检测血清中脂溶性维生素的方法；公开号为CN105158394A的专利申请公开了一种同时检测血清中多种脂溶性维生素的方法。这些方法均未见有效分离3-epi-25-(OH)-VD3，而且存在血清使用量较多，不利于婴幼儿采血分析；或检测的维生素线性范围不够宽，若患者体内浓度过低，则难以准确检测等问题。

因此，急需开发准确、低样本量的脂溶性维生素检测方法。

发明内容

为了克服上述现有技术的不足，本发明提供了一种利用高效液相色谱串联质谱法，同时测定血浆中维生素A、维生素E和25-羟基维生素D的方法。

本发明提供了一种同时测定血浆中多种脂溶性维生素的方法，采用液相色谱串联质谱法进行检测，检测的色谱条件如下：

色谱柱：F5色谱柱；

流动相：流动相A为含体积分数为0.1％甲酸和1mM甲酸铵的甲醇溶液； B为体积分数为0.1％的甲酸水溶液；

梯度洗脱程序为：0-2.7min，78％A；2.71-4.00min，97％A，4.01-4.8min， 78％A。

其中，所述脂溶性维生素为维生素A、维生素E、25-羟基维生素D2、25- 羟基维生素D3和/或3-epi-25-羟基维生素D3。

其中，所述色谱柱的规格为：长度50mm，内径3mm，填料粒径2.6μm；优选的色谱柱型号为Phenomenex Kinetex F5色谱柱。

其中，质谱条件为：离子源：ESI；雾化气流量：3L/min；加热气流量： 5L/min；接口温度：350℃；DL温度：150℃；加热块温度：450℃；干燥气流量：15L/min。

其中，操作步骤如下：