[发明专利]一种CHO-DHFR+细胞株及其应用有效
| 申请号： | 202011393700.3 | 申请日： | 2020-12-03 |
| 公开（公告）号： | CN112501126B | 公开（公告）日： | 2023-04-07 |
| 发明（设计）人： | 乔磊;杨盼盼;郑彬彬;王建刚;吴明远 | 申请（专利权）人： | 康立泰生物医药（青岛）有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C07K14/54;C12N15/85 |
| 代理公司： | 北京三友知识产权代理有限公司 11127 | 代理人： | 刘鑫;韩蕾 |
| 地址： | 266111 山东省青岛市高新区河东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 cho dhfr 细胞株 及其 应用 | ||
1.一种CHO-DHFR+细胞株，该细胞株的保藏编号为CCTCC NO：C2019264。
2.权利要求1所述CHO-DHFR+细胞株在表达重组蛋白中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其中，所述重组蛋白包括重组IL-10。
4.一种表达重组IL-10的工程细胞株的构建方法，其包括以下步骤：
将优化后的IL-10基因连接至pcDNA3.1-β质粒上，构建获得重组质粒载体；所述优化后的IL-10基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；所述重组质粒载体的核苷酸序列如SEQ IDNO：7所示；
采用脂质体2000将重组质粒载体转染进入权利要求1所述CHO-DHFR+细胞株中，得到表达重组IL-10的工程细胞株。
5.权利要求4所述构建方法构建获得的表达重组IL-10的工程细胞株。
6.一种利用权利要求5所述表达重组IL-10的工程细胞株培养表达重组IL-10的方法，其包括以下步骤：
将权利要求5所述的表达重组IL-10的工程细胞株采用含有G418的CD OptiCHO培养基培养，表达获得重组IL-10。
7.根据权利要求6所述的方法，其中，所述重组IL-10的瞬转表达量大于0.96mg/L。
8.根据权利要求6所述的方法，其中，每ml含有G418的CD OptiCHO培养基中，所述G418的质量为200～700μg。
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