[发明专利]一种促进毛发生长的制剂及其制备方法

权利要求书

1.一种用于促进毛发生长或修复毛囊组织的生发制剂的制备方法，所述方法包括如下步骤：

(1)培养间充质干细胞并制备细胞因子溶液；优选的，所述的充质干细胞为脐带间充质干细胞；

(2)以步骤(1)所述细胞因子溶液制备凝胶制剂；

具体的，所述的培养间充质干细胞并制备细胞因子溶液的步骤为：

复苏并使用无血清培养基培养所述间充质干细胞至70％融合度，使用刺激因子于低氧环境下刺激培养24～72小时，随后收集细胞培养液上清并浓缩、过滤；

所述的细胞因子包括但不限于：Vc(1uM-200uM)、VB3(1uM-200uM)、VD3(1uM-200uM)；

所述的低氧环境为氧含量1％-10％；

所述的刺激培养时间为24～48小时。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的浓缩方法为：

使用超滤管进行离心浓缩，所述超滤管的滤膜孔径为3KD-50KD，4℃环境下以2000rpm～4000rpm的转数离心15min～30min，使液体浓缩2～20倍。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的过滤方法为：

离心后去除下层水分，收集上层浓缩液到50ml离心管中，再以2000rpm～4000rpm的转数离心15min～30min，去除下层细胞碎片等沉淀，上层上清液分别过0.8μm、0.45μm和0.22μm滤膜，去除液体中的细菌等杂质。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，

步骤(2)所述的制备步骤为：

将步骤(1)所述的细胞因子溶液与凝胶基质混合，搅拌均匀，所述的凝胶基质为如下含量的任一成分或任意成分的组合：

透明质酸(HA)：0.1％-2％(质体比)，

PEG2000：0.01％-5％(质体比)，

硫酸软骨素(CS)：0.01％-5％(质体比)，

羧甲基壳聚糖：0.01％-5％(质体比)，

卡波姆：0.1％-10％(体积比)。

5.根据权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于，所述方法中还包括如下步骤：

在步骤(2)制得的所述凝胶制剂中，进一步按照如下含量加入如下任一成分或任意成分组合的天然化合物：

黄岑苷0.05％-1％(质体比)、生育酚醋酸酯0.02％-1％(体积比)、D-泛醇(B5)0.05％-1％(质体比)、腺苷0.05％-1％(质体比)、烟酰胺(B3)0.05％-5％(质体比)、槲皮素0.1％-5％(质体比)、柚皮素0.05％-5％(质体比)、低聚原花青素0.05％-5％(质体比)；

优选的，对于上述天然化合物，使用有机溶剂或纯净水溶解后，按照1:1加入步骤(2)制得的凝胶制剂中。

6.根据权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于，所述方法中还包括如下步骤：

在步骤(2)制得的所述凝胶制剂中，进一步添加如下含量的细胞因子：

头蛋白(Noggin)为0.1-50ng/ml、血管内皮细胞生长因子(VEGF)为0.1-50ng/ml、血小板衍生因子α(PDGF-α)为0.1-50ng/ml、胰岛素样生长因子1(IGF-1)为0.05-25ng/ml、集落刺激因子(CSF)为0.1-50ng/ml、干细胞生长因子(SGF)为0.1-50ng/ml、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)为0.1-50ng/ml、角化细胞生长因子(KGF)为0.1-50ng/ml、金属蛋白酶2(MMP-2)为0.1-50ng/ml、金属蛋白酶9(MMP-9)为0.1-50ng/ml、前列腺素2(PGE2)为0.1-50ng/ml、血管生成素1(Ang-1)0.1-50ng/ml。

7.权利要求1-6任一所述的方法制备获得的生发制剂。

8.权利要求7所述的生发制剂在制备治疗脱发的药物中的应用。