[发明专利]一种筛选抗糖脂代谢紊乱药物的方法

权利要求书

1.一种HepG2细胞高脂模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将HepG2细胞接种在24孔板中，每孔500μL，然后孵育12h直至细胞密度达到80％～90％，然后用含有10％v/v胎牛血清的DMEM培养基稀释的1.0mg/mL晚期糖基化终末产物AGEs(advanced glycation end products)溶液诱导HepG2细胞形成高脂模型，即模型组，以添加1.0mg/mLBSA溶液的HepG2细胞组作为阴性对照组；

(2)测定细胞中TC、TG、LDL以及HDL的含量，当模型组细胞比对照组细胞的TC、TG、LDL含量明显升高，HDL含量明显下降时，HepG2细胞高脂模型构建成功。

2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述的晚期糖基化终末产物AGEs通过以下方法制备得到：

将20mg/mLBSA溶液10mL、500mM葡萄糖溶液5mL、0.02％w/v叠氮化钠溶液与pH 7.4的200mM磷酸盐缓冲液混合，在培养箱中孵育60d后，在蒸馏水中使用分子量为Mw 8000-14000Da的透析袋进行透析，冷冻干燥即得AGEs粉末。

3.按照权利要求1或2所述的方法构建得到的HepG2细胞高脂模型。

4.权利要求3所述的HepG2细胞高脂模型在筛选抗糖脂代谢紊乱药物中的应用。

5.一种筛选抗糖脂代谢紊乱药物的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)按照权利要求1或2所述的方法构建HepG2细胞高脂模型，用含有10％v/v胎牛血清的DMEM培养基代替AGEs处理作为空白组；

(2)向构建好的HepG2高脂模型细胞中加入待筛选的药物溶液，培养箱中继续孵育48h，测定每孔样品上清中TC、TG、HDL、LDL的含量；以洛伐他汀作为阳性对照，1.0mg/mL的BSA溶液作为阴性对照；

(3)测定各组细胞上清中TC、TG、LDL以及HDL的含量，若待筛选的药物在给药后，TC、TG和LDL的含量下降，HDL的含量升高，则说明具有抗糖脂代谢紊乱的作用。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(2)中向构建好的HepG2高脂模型细胞中加入待筛选的药物溶液500μL。