[发明专利]一种筛选抗糖脂代谢紊乱药物的方法

说明书

本发明公开了一种筛选抗糖脂代谢紊乱药物的方法。该筛选方法以非酶糖基化实验筛选降糖药物，以参与糖尿病发生、发展的主要因素之一晚期糖基化终末产物(AGE_S)诱导HepG2细胞构建高脂模型，并通过该模型筛选降脂药物，将糖代谢与脂代谢联系起来，达到筛选抗糖脂代谢紊乱药物的目的。实验结果表明，本发明提供的以AGE_S诱导HepG2细胞形成高脂模型的新方法，造模成功率高，可以模拟高脂模型对抗糖脂代谢紊乱药物进行快速筛选。以晚期糖基化终末产物AGE_S将降糖药物与降脂药物的筛选联系起来，符合糖脂代谢相辅相成、相互影响的理论，达到筛选抗糖脂代谢紊乱药物的目的，为抗糖脂代谢紊乱药物的筛选提供了新的思路与方法。

技术领域

本发明涉及一种细胞高脂模型构建的方法，特别涉及以参与糖尿病发生、发展的主要因素之一晚期糖基化终末产物(AGE_S)诱导细胞高脂模型的新方法，及该模型在筛选抗糖脂代谢紊乱药物中的应用。

背景技术

糖代谢紊乱是指调节葡萄糖、果糖、半乳糖等代谢的激素或酶的结构、功能、浓度异常，或组织、器官的病理生理变化，而脂代谢紊乱指先天性或获得性因素造成的血液及其他组织器官中脂质及其代谢产物质和量的异常。经研究发现，40％Ⅱ型糖尿病患者合并脂代谢紊乱，且所有糖尿病患者至少有一种类型的血脂异常，而其他患者常常伴有高密度脂蛋白(HDL)水平的降低和低密度脂蛋白的升高(LDL)和甘油三酯(TG)水平的升高，表明糖尿病的发生与发展与血脂水平的异常有着密不可分的关系。而脂代谢紊乱又可诱发加重胰岛素抵抗，进一步可导致β细胞功能衰竭，从而加重糖代谢紊乱。脂肪堆积，导致脂肪分解活跃，大量游离脂肪酸(FFA)进入血液，产生高FFA血症，FFA可引起高胰岛素血症,并促进糖异生，因而随着肥胖在世界范围的流行，糖脂代谢紊乱作为代谢性疾病的重要特征，正悄无声息地威胁着人类的健康。糖脂代谢紊乱是冠心病、脑卒中、脂肪肝及胰腺炎等慢性并发症等疾病的病理基础和主要危险因子。与糖脂代谢紊乱相关的疾病主要有糖尿病、糖耐量减低、空腹血糖减损、高脂血症、脂肪肝(肥胖型、糖尿病型)。临床上糖尿病、高脂血症等代谢紊乱疾病的发病率呈日益增加的趋势，针对这一迫在眉睫的现状，进行防治糖脂代谢紊乱相关研究已迫在眉睫。

目前，抗糖脂代谢紊乱药物的筛选主要以大鼠、小鼠等动物模型为主，并只能对药物在降脂或降糖方面的药理作用进行单独考察，没有将糖脂代谢关联到一起，且实验周期长，投入人力和物力大，不利于抗糖脂代谢紊乱药物的快速筛选。而细胞的培养与造模都具有快速、便捷、成功率高等众多优点，因而，从细胞水平的研究有助于更快速、便捷地筛选抗糖脂代谢紊乱药物，是进行抗糖脂代谢紊乱和相关疾病病理机制探索及药物研发的重要途径。

本发明研究发现参与糖尿病发生、发展的主要因素之一晚期糖基化终末产物(AGE_S)可诱导HepG2细胞产生高脂模型，且造模成功率高，可以模拟高脂模型进行同时筛选降糖、降脂药物。此外本发明发现受试药大黄素能够对AGEs的生成具有较强的抑制作用，显著抑制由AGE_S诱导的TC、TG和LDL含量的升高以及HDL含量的降低。证明此方法可作为一种同时筛选降糖及降脂药物的新方法，符合糖脂代谢相互关联、相辅相成的理论，同时大黄素能通过糖脂代谢相关联的通路起到很好的降脂作用，可作为治疗糖脂代谢紊乱的潜在药物。

发明内容

鉴于现有技术的不足，本发明目的之一在于提供一种HepG2细胞高脂模型的构建方法，该方法以糖代谢终末产物AGEs诱导HepG2细胞构建高脂模型，通过糖脂代谢相关联的通路来考察受试药物的降糖和降脂活性；

本发明的目的之二在于提供一种筛选抗糖脂代谢紊乱药物的方法，该方法使用上述的HepG2细胞高脂模型来筛选药物，从而为抗糖脂代谢紊乱药物的筛选提供了新的思路与方法。

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：

本发明的一种HepG2细胞高脂模型的构建方法，包括以下步骤：