[发明专利]三角帆蚌性别的鉴定方法

权利要求书

1.一种三角帆蚌性别的鉴定方法，其特征在于：其包括如下步骤：

(1)、剪取三角帆蚌的性腺组织放入灭菌离心管中，加入裂解液使其裂解；在55℃下裂解3-4h至澄清，过程中每0.5-1h翻转摇动一次；

(2)、加入苯酚，上下颠倒，离心；吸取上清液，加入体积比为25:24:1的苯酚：氯仿：异戊醇，上下颠倒，离心；吸取上清液，加入体积比为24:1的氯仿：异戊醇，上下颠倒，离心；吸取上清液，加入冰乙醇，低温静置30min，离心；弃上清液，用冰乙醇洗涤，离心，并将沉淀物在无菌环境下干燥；

(3)、在干燥后的沉淀物中加入双蒸水溶解DNA，4℃放置过夜溶解；测定浓度和纯度，浓度测定完成后加入双蒸水调节浓度；

(4)、以DNA为模板，设计引物进行PCR扩增；

(5)、配制琼脂糖凝胶，待凝胶凝固后，将PCR产物点入凝胶孔中，观察电泳结果。

2.根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于：步骤(1)中，所述裂解液的成分包括双蒸水、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、乙二胺四乙酸二钠、癸二酸二酰肼和蛋白酶k。

3.根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于：步骤(2)中，所述颠倒的时间均为8±0.1min；所述离心的转速均为11000±100r/min，时间均为5-10min，温度均为6±0.1℃。

4.根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于：步骤(4)中，所述引物中正向引物序列为：SEQ ID NO.1，反向引物序列为：SEQ ID NO.2。

5.根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于：步骤(4)中，所述PCR扩增的体系为：DNA模板为1μL，正向引物和反向引物各为1μL，2×Taq-mix酶为12.5μL，最后用ddH₂O补足至25μL。

6.根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于：步骤(4)中，所述PCR扩增的条件为：94℃预变性3min；94℃变性30s，55℃复性30s，72℃延伸1min，共35个循环，最后72℃延伸5min。

7.根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于：步骤(5)中，所述电泳结果为：如果有电泳条带则为雄性，没有电泳条带则为雌性。