[发明专利]一种柯萨奇病毒CV-A2的病毒样颗粒

权利要求书

1.一种柯萨奇病毒CV-A2的病毒样颗粒VLPs，其特征在于，

所述的柯萨奇病毒CV-A2毒株为CV-A2-1580V4/CHN XY/2017；

所述的VLPs用昆虫载体表达，制备方法包括如下步骤：

（1）重组杆状病毒Bacmid质粒的构建：

将优化的CV-A2 P1和CV-A2 3CD基因分别克隆在pFastBacdual质粒的pPh和P10启动子之后，转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞，提取阳性质粒即重组杆状病毒Bacmid质粒；

所述的优化的CV-A2 P1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示

所述的优化的CV-A2 3CD基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.4和所示；

（2）重组杆状病毒的表达：

用重组杆状病毒Bacmid质粒转染昆虫细胞，获得重组杆状病毒；

（3）柯萨奇病毒CV-A2 VLPs 的制备：

将获得的重组杆状病毒按MOI=0.5接种昆虫细胞，所述的昆虫细胞为sf-9，5-6天后收获上清，并提取分离柯萨奇病毒VLPs；所述的提取分离柯萨奇病毒VLPs的步骤为：

1）收集CV-A2 VLPs感染的Sf-9 细胞液，反复冻融，3000 rpm 4℃离心10 min去细胞碎片；

2）上清经孔径为30 kD的膜包超滤浓缩30倍；

3）浓缩产物通过20%蔗糖，15000 g垫底，离心4 h，随后1.31g/ml CsCl密度 25000g离心20 h，抽取目标条带即为CV-A2 VLPs。

2.根据权利要求1所述的柯萨奇病毒CV-A2的病毒样颗粒VLPs，其特征在于，所述的柯萨奇病毒CV-A2的病毒样颗粒VLPs的制备方法还包括：

（4）利用SDS-PAGE、Western-Blot、间接免疫荧光和透射电镜鉴定VLPs。

3.氨基酸序列SEQ ID NO.5所示柯萨奇病毒CV-A2 P1蛋白与氨基酸序列SEQ ID NO.6所示柯萨奇病毒CV-A2 3CD蛋白在制备柯萨奇病毒的病毒样颗粒VLPs中的应用。

4.权利要求1所述的柯萨奇病毒CV-A2的病毒样颗粒VLPs在制备疫苗或药物中的应用，所述的疫苗或药物是治疗或预防手足口病的疫苗或药物。