[发明专利]一种柯萨奇病毒CV-A2的病毒样颗粒

说明书

本发明涉及一种柯萨奇病毒CV‑A2的病毒样颗粒，其特征在于，所述的病毒样颗粒是用昆虫载体表达的，其包括优化的CV‑A2 P1蛋白和优化的CV‑A2 P13CD蛋白；所述的优化的CV‑A2 P1蛋白的核苷酸序列和氨基酸序列分别如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.5所示；所述的优化的CV‑A2 P13CD蛋白的核苷酸序列和氨基酸序列分别如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.6所示；所述的柯萨奇病毒CV‑A2毒株为CV‑A2‑1580V4/CHN XY/2017。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体的，涉及一种柯萨奇病毒CV-A2的病毒样颗粒。

背景技术

手足口病(Hand,Foot and Mouth Disease，HFMD)是由多种肠道病毒感染引起的一种病毒性疾病。 HFMD在世界范围内出现多次暴发流行，以夏秋季常见。患者主要为学龄前儿童，尤以3岁以下年龄组发病率最高，临床表现为口腔黏膜、手和足等多处疱疹，少数可引起脑炎，肺水肿，弛缓性麻痹，心肌炎和心脏衰竭等严重并发症,甚至导致死亡病例^[1]。

引起HFMD的肠道病毒至少有20多个型，包括柯萨奇病毒A组(Coxsackie virus A，CVA)2、4、5、 6、10、12和16型，柯萨奇病毒B组(Coxsackie virus B,CVB)的5型，埃可病毒(Echo virus,Echo)以及肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV-A71)。CV-A2是柯萨奇病毒A组成员，于1947年在美国特拉华首次分离得到原型株Fleetwood^[2],其基因结构分为：5'非编码区、3'非编码区及位于非编码区之间的开放阅读框架。其编码区包含编码结构蛋白的P1区和编码非结构蛋白的P2，P3区。P1区编码4种衣壳蛋白VP1、 VP2、VP3、VP4，除VP4包埋在病毒粒子外壳的内侧与病毒核心紧密连接以外，其他3种结构蛋白均暴露病毒颗粒的表面；P2和P3区编码7种非结构蛋白2A，2B，2C，3A，3B，3C和3D，与病毒RNA的复制、转录，病毒多聚蛋白的剪切、病毒颗粒的装配等功能相关。细胞表达的重组多聚蛋白P1被同时表达的3CD酶剪切为VP0、VP1、VP2、VP3和VP4，装配为成分与病毒感染后的前颗粒(Procapsid)相似的病毒样颗粒。CV-A2主要引起疱疹性咽峡炎、脑炎及脊髓炎、心肌炎和心包炎、流行性胸痛、呼吸道感染、手足口病、婴儿腹泻等，引起暴发流行^[3-7]。2008年中国台湾肠道病毒流行，在221份采集样品中，73％(161/221 例)有疱疹性咽峡炎，27％(60/221例)为手足口病^[8]。2012年瑞典肠道病毒早期感染的随访中，CV-A2 的感染比例占9.6％，仅次于CV-A9(13.5％)和CV-A16(11.5％)^[9]。CV-A2感染所引起的疾病多数为症状较轻，病程较短，且较少出现并发症或留下后遗症^[10-12]。但是也出现因感染CV-A2引起手足口重症并导致死亡的报道^[13]：2012年多名急性感染后死亡的患儿的尸检结果均显示CV-A2感染成阳性，且分离株为CV-A2 与EV-71和CV-A4的重组株。本实验室于2016年10月至2017年12月，在湖北省襄阳市进行的HFMD病原学研究表明，CV-A2可引起HFMD暴发流行，且与CV-A5、CV-A6、CV-A10、CV-A16、和EV-A71共同流行，成为HFMD的主要病原体之一；同时发现，CV-A2也可引起重症病例。因此，对这种血清型肠道病毒的监测和基础研究，具有非常重要的意义和实用价值。

目前，预防HFMD的主要候选疫苗为细胞基质全病毒灭活疫苗和病毒样颗粒(VLP)疫苗。然而，灭活疫苗中除EV-A71和CV-A16外，其它主要血清型病毒难于在人用疫苗基质细胞中生长。VLP具有产量大、易富集和易纯化的特点，也使得其逐渐广泛应用于疫苗领域。因此探索杆状病毒Bac-to-Bac表达系统，纯化CV-A2 VLPs，具有重要的应用意义，可为CV-A2以及多价手足口疫苗的研制提供有力参考。

参考文献