[发明专利]一种花椒种苗的高通量繁育方法及培养基

说明书

本发明涉及组织培养及种苗高通量繁育技术领域，特别涉及一种花椒种苗的高通量繁育方法及培养基。该方法包括：将灭菌后的带腋芽茎段接种到丛生芽诱导培养基中进行丛生芽诱导，所述丛生芽诱导培养基为含有0.5～3.0mg/L 6‑BA、0.1～1.0mg/L NAA的MS培养基；将丛生芽分株后接种到增殖生根培养基上进行增殖生根培养；所述增殖生根培养基为含有0.1～0.5mg/L NAA的1/2MS培养基。本发明以带腋芽茎段为外植体材料及特定的诱导培养基，从而大大提高了丛生芽的分化率，缩短育苗周期，对日后的花椒种苗的高通量繁育具有重要意义。

技术领域

本发明涉及组织培养及种苗高通量繁育技术领域，特别涉及一种花椒种苗的高通量繁育方法及培养基。

背景技术

花椒(Zanthoxylum bungeanum Maxim)是人们喜爱的上等调味品和副食品加工的主要佐料，在国内外调味品市场中占有重要位置。花椒具有重要的经济价值，被广泛应用于食品、医药、日用化工工业。随着科技的发展，人们不断地开发花椒的新用途。然而，总的来看，虽然我国花椒产业的发展取得了很大的成绩，但仍处于初级开发阶段，资源尚未得到充分的开发利用。而植物组织培养对于花椒的良种快繁、脱毒苗培养、转基因植物培育、种质保存和香料有机物的提取等都有着十分重要的意义。

目前花椒主要采用种子繁育，此方法简单易行，群众易掌握，培育苗木时间短，苗木根系发达，生长健壮，寿命长，适应性强，但采用这种方法，常会因采种或调种不当，易于造成种质混杂，且后代常出现性状分离，无法保持母株的优良性状，影响经济效益。而采用无性繁育方法，如嫁接、扦插与组培等。能保证母体品种的优良遗传特性和经济性状，减少品种的分化和衰退、提高引进品种的适应性，扩大繁育和迅速推广优良品种。其中组织培养技术，主要是在室内进行种苗繁育，避免遭受天气因素的干扰，生长状态相对一致，利于集中管理，降低成本。并且以花椒愈伤组织作为外植体材料，通过丛生芽诱导或进行体细胞胚发生进行植株再生，能够摆脱对母株材料的限制，极大地提高花椒种苗的繁育效率，达到高通量繁育种苗的目的，而且利用大规模细胞培养可以对花椒的次生代谢物质进行生产，提高经济效益。因此组织培养技术对于花椒种苗繁育具有重要的实用价值。

申请公布号CN108496804A发明公开了一种无刺花椒组织培养初代诱导的方法，包括取外植体，外植体消毒，接种和诱导培养，通过优化取外植体、消毒处理、接种方式及诱导培养基，该方法有效抑制了无刺花椒外植体的内生菌产生，建立了无刺花椒组织培养初代诱导技术体系。其接种方法具体为：采用将茎段的上端插入到培养基中，腋芽浸没于培养基，茎段下端暴露在培养基表面外，培养基配方为含0mg/L 6-BA、0.1mg/L NAA、4.0mg/LZT，0.lmg/L植物抑菌剂PPM、6g/L卡拉胶和30g/L蔗糖的MS培养基。但该诱导培养基对花椒外植体的丛生芽诱导率偏低。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种花椒种苗的高通量繁育方法及培养基。本方法最终实现了只需要以带腋芽茎段为外植体，进行增殖分化，再生根成完整植株，提高了丛生芽诱导率，节省了初级诱导时间与材料，同时避免了初级诱导中内生菌污染的问题。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种花椒种苗的高通量繁育方法，包括以下步骤：

将灭菌后的带腋芽茎段接种到丛生芽诱导培养基中进行丛生芽诱导，丛生芽诱导培养基为含有0.5～3.0mg/L 6-BA、0.1～1.0mg/L NAA的MS培养基；

将丛生芽分株后接种到增殖生根培养基上进行增殖生根培养；增殖生根培养基为含有0.1～0.5mg/L NAA的1/2MS培养基。

作为优选，丛生芽诱导培养基为含有2.0mg/L 6-BA、0.5mg/L NAA的MS培养基。

作为优选，增殖生根培养基为含有0.5mg/L NAA的1/2MS培养基。