[发明专利]一种制备串联重复蛋白质的方法与应用在审
申请号: | 202011405477.X | 申请日: | 2020-12-03 |
公开(公告)号: | CN113755512A | 公开(公告)日: | 2021-12-07 |
发明(设计)人: | 毕昌昊;张学礼;刘丽;赵东东;李斯微 | 申请(专利权)人: | 中国科学院天津工业生物技术研究所 |
主分类号: | C12N15/70 | 分类号: | C12N15/70;C12N15/12;C12N1/21;C07K14/435;C12R1/19 |
代理公司: | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人: | 莫舒颖 |
地址: | 300308 天津*** | 国省代码: | 天津;12 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 制备 串联 重复 蛋白质 方法 应用 | ||
1.一种制备串联重复蛋白质的方法,其特征在于:包括将含有名称为单拷贝基因表达盒的双链DNA分子的表达载体导入受体细胞得到重组细胞,培养所述重组细胞,表达得到串联重复蛋白质;所述单拷贝基因表达盒含有启动子,与所述启动子相连的名称为3’内含子的内含子,与所述3’内含子相连的名称为单拷贝基因的目的蛋白编码基因,与所述目的蛋白编码基因相连的核糖体结合位点的编码序列,与所述核糖体结合位点的编码序列相连的间隔序列,与所述间隔序列相连的起始密码子,与所述起始密码子相连的名称为5’内含子的内含子;所述3’内含子和所述5’内含子满足条件A,所述条件A为在所述重组细胞中所述单拷贝基因表达盒转录出的前体RNA通过碱基互补配对形成剪接泡,并通过剪接反应产生成熟的环状单链RNA分子;所述目的蛋白编码基因不含终止密码子。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:所述单拷贝基因表达盒由启动子,所述3’内含子、所述目的蛋白编码基因、所述核糖体结合位点的编码序列、所述间隔序列、所述起始密码子和所述5’内含子连接而成。
3.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于:所述目的蛋白为MaSp1。
4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于:所述MaSp1是氨基酸序列为SEQ ID No.2的蛋白质。
5.根据权利要求1-4中任一所述的方法,其特征在于:所述受体细胞为C1)-C4)中的任一种:
C1)原核微生物细胞;
C2)革兰氏阴性细菌细胞;
C3)埃希氏菌属细菌细胞;
C4)大肠杆菌BL21(DE3)细胞。
6.根据权利要求1-5中任一所述的方法,其特征在于:所述满足条件A的所述3’内含子和所述5’内含子为如下一对内含子:
所述3’内含子含有6个剪接泡和3’剪接位点,6个剪接泡的编码DNA的名称分别为3’sp1基因、3’sp2基因、3’sp3基因、3’sp4基因、3’sp5基因和3’sp6基因,所述编码3’剪接位点的DNA的称为3’ss基因;所述3’sp1基因是一条链的核苷酸序列是序列表中序列1第5193-5214位的双链DNA分子;所述3’sp2基因是一条链的核苷酸序列是序列表中序列1第5278-5289位的双链DNA分子;所述3’sp3基因是一条链的核苷酸序列是序列表中序列1第5293-5306位的双链DNA分子;所述3’sp4基因是一条链的核苷酸序列是序列表中序列1第5318-5337位的双链DNA分子;所述3’sp5基因是一条链的核苷酸序列是序列表中序列1第5352-5370位的双链DNA分子;所述3’sp6基因是一条链的核苷酸序列是序列表中序列1第5371-5386位的双链DNA分子;3’剪接位点是一条链的核苷酸序列是序列表中序列1第5419-5423位的双链DNA分子;
所述5’内含子含有5’剪接位点和5’ss序列;所述5’剪接位点的核苷酸序列为序列1的第5547-5556位;所述5’ss序列的核苷酸序列为序列1的5557-5721位,包含4个剪接泡,编码DNA的名称分别为5’sp1基因、5’sp2基因、5’sp3基因和5’sp4基因;所述5’sp1基因是一条链的核苷酸序列是序列表中序列1的第5569-5590位的双链DNA分子;所述5’sp2基因是一条链的核苷酸序列是序列表中序列1第5634-5643位的双链DNA分子;所述5’sp3基因是一条链的核苷酸序列是序列表中序列1第5648-5698位的双链DNA分子,所述5’sp4基因是一条链的核苷酸序列是序列表中序列1第5671-5687位的双链DNA分子。
7.根据权利要求1-6中任一所述的方法,其特征在于:所述3’内含子是一条链的核苷酸序列为序列1的第5190-5423位核苷酸的双链DNA,所述5’内含子是一条链的核苷酸序列为序列1的第5547-5721位核苷酸的双链DNA。
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