[发明专利]一种制备串联重复蛋白质的方法与应用

权利要求书

1.一种制备串联重复蛋白质的方法，其特征在于：包括将含有名称为单拷贝基因表达盒的双链DNA分子的表达载体导入受体细胞得到重组细胞，培养所述重组细胞，表达得到串联重复蛋白质；所述单拷贝基因表达盒含有启动子，与所述启动子相连的名称为3’内含子的内含子，与所述3’内含子相连的名称为单拷贝基因的目的蛋白编码基因，与所述目的蛋白编码基因相连的核糖体结合位点的编码序列，与所述核糖体结合位点的编码序列相连的间隔序列，与所述间隔序列相连的起始密码子，与所述起始密码子相连的名称为5’内含子的内含子；所述3’内含子和所述5’内含子满足条件A，所述条件A为在所述重组细胞中所述单拷贝基因表达盒转录出的前体RNA通过碱基互补配对形成剪接泡，并通过剪接反应产生成熟的环状单链RNA分子；所述目的蛋白编码基因不含终止密码子。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述单拷贝基因表达盒由启动子，所述3’内含子、所述目的蛋白编码基因、所述核糖体结合位点的编码序列、所述间隔序列、所述起始密码子和所述5’内含子连接而成。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述目的蛋白为MaSp1。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述MaSp1是氨基酸序列为SEQ ID No.2的蛋白质。

5.根据权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：所述受体细胞为C1)-C4)中的任一种:

C1)原核微生物细胞；

C2)革兰氏阴性细菌细胞；

C3)埃希氏菌属细菌细胞；

C4)大肠杆菌BL21(DE3)细胞。

6.根据权利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：所述满足条件A的所述3’内含子和所述5’内含子为如下一对内含子：

所述3’内含子含有6个剪接泡和3’剪接位点，6个剪接泡的编码DNA的名称分别为3’sp1基因、3’sp2基因、3’sp3基因、3’sp4基因、3’sp5基因和3’sp6基因，所述编码3’剪接位点的DNA的称为3’ss基因；所述3’sp1基因是一条链的核苷酸序列是序列表中序列1第5193-5214位的双链DNA分子；所述3’sp2基因是一条链的核苷酸序列是序列表中序列1第5278-5289位的双链DNA分子；所述3’sp3基因是一条链的核苷酸序列是序列表中序列1第5293-5306位的双链DNA分子；所述3’sp4基因是一条链的核苷酸序列是序列表中序列1第5318-5337位的双链DNA分子；所述3’sp5基因是一条链的核苷酸序列是序列表中序列1第5352-5370位的双链DNA分子；所述3’sp6基因是一条链的核苷酸序列是序列表中序列1第5371-5386位的双链DNA分子；3’剪接位点是一条链的核苷酸序列是序列表中序列1第5419-5423位的双链DNA分子；

所述5’内含子含有5’剪接位点和5’ss序列；所述5’剪接位点的核苷酸序列为序列1的第5547-5556位；所述5’ss序列的核苷酸序列为序列1的5557-5721位，包含4个剪接泡，编码DNA的名称分别为5’sp1基因、5’sp2基因、5’sp3基因和5’sp4基因；所述5’sp1基因是一条链的核苷酸序列是序列表中序列1的第5569-5590位的双链DNA分子；所述5’sp2基因是一条链的核苷酸序列是序列表中序列1第5634-5643位的双链DNA分子；所述5’sp3基因是一条链的核苷酸序列是序列表中序列1第5648-5698位的双链DNA分子，所述5’sp4基因是一条链的核苷酸序列是序列表中序列1第5671-5687位的双链DNA分子。

7.根据权利要求1-6中任一所述的方法，其特征在于：所述3’内含子是一条链的核苷酸序列为序列1的第5190-5423位核苷酸的双链DNA，所述5’内含子是一条链的核苷酸序列为序列1的第5547-5721位核苷酸的双链DNA。