[发明专利]一种用于检测和鉴别果胶杆菌属细菌的引物对、试剂盒及方法有效
| 申请号： | 202011414082.6 | 申请日： | 2020-12-04 |
| 公开（公告）号： | CN112626241B | 公开（公告）日： | 2022-05-06 |
| 发明（设计）人： | 张健男;马媛媛;李斌;安千里 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/686;C12N15/11;C12Q1/04;C12R1/01 |
| 代理公司： | 杭州天勤知识产权代理有限公司 33224 | 代理人： | 沈金龙 |
| 地址： | 310013 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 检测 鉴别 果胶 杆菌 细菌 引物 试剂盒 方法 | ||
1.一种用于检测和鉴别果胶杆菌属(Pectobacterium)细菌的引物对，其特征在于，包括正向引物23SPecF和反向引物23SPecR，其核苷酸序列分别为：
正向引物23SPecF：5’-CGGTAAGCTGATATGAAGCGTTATAC-3’；
反向引物23SPecR：5’-TGTGTACGGGACTATCACCCTTTACTGT-3’。
2.如权利要求1所述引物对在检测和鉴别果胶杆菌属(Pectobacterium)细菌中的应用。
3.如权利要求1所述引物对在制备用于检测和鉴别果胶杆菌属(Pectobacterium)细菌的试剂盒中的应用。
4.一种用于检测和鉴别果胶杆菌属(Pectobacterium)细菌的试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1所述引物对。
5.一种用于检测和鉴别果胶杆菌属(Pectobacterium)细菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)以样品的DNA作为扩增模板，使用权利要求1所述引物对进行扩增；
(2)检测扩增产物，若扩增出266bp的DNA片段，则样品含有果胶杆菌属(Pectobacterium)细菌；否则，样品中不含果胶杆菌属(Pectobacterium)细菌。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(1)中样品为细菌、提取的细菌DNA或含有细菌/细菌DNA的粗提液。
7.如权利要求5所述的方法，其特征在于，扩增时使用PCR扩增，然后用电泳检测PCR扩增产物；或者使用荧光定量PCR扩增并检测。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，PCR扩增时，扩增反应体系组成为：
9.如权利要求7所述的方法，其特征在于，PCR扩增时，扩增程序为：94℃预变性3min；94℃变性30s，65℃退火30s，72℃延伸30s，35个循环；72℃延伸5min。
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