[发明专利]一种金线莲多倍体诱导方法

权利要求书

1.一种金线莲多倍体诱导方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：

（1）诱导剂准备：先将20 mg氨磺灵粉末溶于1 mL二甲基亚砜中，配制浓度为2% 的母液，用纯净水稀释浓度为0.002% 的氨磺灵溶液，冻融灭菌处理后密封于4摄氏度冰箱保存；

（2）茎段预培养处理：选取长势一致、生长健壮的无菌试管苗，在超净工作台中切成3-4cm的带有多个芽点的茎段，接入MS+1 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+0.5 mg/L KT+0.5g/L AC+30g/L 蔗糖的培养基中，预培养2-3天，至茎段的侧芽部位出现肉眼可见白色芽点；

（3）诱导剂浸泡处理：将已长出芽的长茎段浸泡于0.002% 氨磺灵溶液中，置于23摄氏度、12小时光照条件下，浸泡处理108h，每6小时摇晃一次，使材料与药液充分接触；浸泡结束后，用无菌水冲洗茎段3-5次，切成1-1.5cm带单个芽的小段，接入增殖培养基 MS+ 2mg/L6-BA+ 0.5mg/L NAA+0.5g/L AC + 30g/L 蔗糖上在温度23±2℃、光照强度2000-3000lx、光照时间12h/d条件下进行培养，以上操作均在无菌条件下进行；

（4）筛选培养：为保证其变异的稳定性，将已经增殖培养6个月的诱导小苗进行扩繁，接入增殖培养基 MS+ 2mg/L 6-BA+ 0.5mg/L NAA+0.5g/L AC + 30g/L 蔗糖上在温度23±2℃、光照强度2000-3000lx、光照时间12h/d条件下进行培养，培养9个月后对其进行筛选和鉴定。