[发明专利]基于效率的qPCR初始浓度检测的高鲁棒性六参数全局拟合法

权利要求书

1.一种基于效率的qPCR初始浓度检测的高鲁棒性六参数全局拟合法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、建立六参数全局拟合的递推公式如下式(1)所示：

式(1)中，F_n表示第n次循环所获得的荧光值，a、b、c、d均为模型参数；

步骤2、设定背景荧光值为参数bg，设置最初荧光值为参数F₀，将包括参数bg、参数F₀、参数a、b、c、d在内的总计六个参数代入式(1)所示的递推公式，获取六参数的拟合结果序列；

步骤3、将拟合结果序列和机器获取的所有实验值进行比较，利用优化算法对式(1)所示的递推公式进行优化，最终获取参数bg、参数F₀、参数a、b、c、d的最优参数值；

步骤4、获取拟合后的效率变化趋势

利用基于化学原理的效率拟合公式，如下式(3)所示，代入步骤3获取的六个最优参数值，计算得到拟合后的每个扩增循环的效率值，获取效率变化趋势：

式(3)中，E_n表示第n次循环所获得的效率值；

步骤5、根据机理分析，将获取的效率值进行线性放缩，使得效率范围放缩到相应区间；

步骤6、反推得到精确的初始荧光值

将拟合得到的末态循环的荧光值，利用放缩后的每个循环的效率值，进行逐步反推计算，得到最初的检测荧光值；

步骤7、对应获取最初浓度值。

2.如权利要求1所述的一种基于效率的qPCR初始浓度检测的高鲁棒性六参数全局拟合法，其特征在于，利用优化算法对式(1)所示的递推公式进行优化时，设置均方差函数作为误差函数对问题进行最优化，最终获得全局拟合的参数bg、参数F₀、参数a、b、c、d的最优参数值。

3.如权利要求1所述的一种基于效率的qPCR初始浓度检测的高鲁棒性六参数全局拟合法，其特征在于，步骤5中，效率值进行线性放缩时，使得效率最小值保持不变，效率最大值放缩到2。

4.如权利要求3所述的一种基于效率的qPCR初始浓度检测的高鲁棒性六参数全局拟合法，其特征在于，步骤5中，设放缩后的第n次循环的效率值为则有：

式(4)中，E_min为步骤4获得的效率最小值，E_max为步骤4获得的效率最大值。

5.如权利要求1所述的一种基于效率的qPCR初始浓度检测的高鲁棒性六参数全局拟合法，其特征在于，步骤7中，根据已知的荧光值大小和初始浓度的对应关系曲线，或者已知的一对荧光值和初始浓度的数据对，通过对照曲线或者等比计算，得到本次实验的初始检测荧光值对应的初始浓度。