[发明专利]一种海洋盐单胞菌胞外多糖在制备免疫增强剂中的应用

权利要求书

1.一种海洋盐单胞菌胞外多糖，其特征在于：海洋盐单胞菌来源于中国南海盐单胞菌Halomonassp.2E1，该菌种保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日期：2020年10月29日，保藏编号：CGMCC NO. 20969；海洋盐单胞菌胞外多糖以下方法制备：将海洋盐单胞菌Halomonas sp. 2E1按0.1~1%接种于2216E培养基中，置于摇床上25~40℃、100~200 rpm震荡培养24~48 h；发酵完毕后将发酵液4000~8000 rpm下离心5~30 min去除菌体，收集上清液，加入2~4倍体积的95%乙醇溶液，离心收集沉淀，加适量蒸馏水复溶后透析，-60~-80℃冻干24~48 h得到粗胞外多糖；采用DEAE Fast Flow离子交换柱层析对粗多糖进行纯化，先用蒸馏水洗脱1~3个柱体积，再用0~2mol/L氯化钠溶液洗脱8~12个柱体积，得到的纯化组份进行透析、冻干，继续采用Sephadex G75凝胶柱层析进行纯化，流动相为蒸馏水或0.1~1 mol/L碳酸氢铵溶液，最终得到纯化的胞外多糖，即为EPS2E1，2216E培养基为0.1~1%蛋白胨、0.1~0.2%酵母浸粉、0.5~2%蔗糖和陈海水。

2.权利要求1所述的海洋盐单胞菌胞外多糖的制备方法，其特征在于：海洋盐单胞菌胞外多糖以下方法制备：将海洋盐单胞菌Halomonas sp. 2E1按0.1~1%接种于2216E培养基中，置于摇床上25~40℃、100~200 rpm震荡培养24~48 h；发酵完毕后将发酵液4000~8000rpm下离心5~30 min去除菌体，收集上清液，加入2~4倍体积的95%乙醇溶液，离心收集沉淀，加适量蒸馏水复溶后透析，-60~-80℃冻干24~48 h得到粗胞外多糖；采用DEAE Fast Flow离子交换柱层析对粗多糖进行纯化，先用蒸馏水洗脱1~3个柱体积，再用0~2mol/L氯化钠溶液洗脱8~12个柱体积，得到的纯化组份进行透析、冻干，继续采用Sephadex G75凝胶柱层析进行纯化，流动相为蒸馏水或0.1~1 mol/L碳酸氢铵溶液，最终得到纯化的胞外多糖，即为EPS2E1，2216E培养基为0.1~1%蛋白胨、0.1~0.2%酵母浸粉、0.5~2%蔗糖和陈海水。

3.一种权利要求1所述的海洋盐单胞菌胞外多糖的应用，其特征在于：海洋盐单胞菌Halomonas sp. 2E1的胞外多糖即为EPS2E1在制备药物组合物中的应用。

4.根据权利要求3所述的海洋盐单胞菌胞外多糖的应用，其特征在于：EPS2E1为一种甘露聚糖，分子量范围为30~60 kD，单糖组成为甘露糖和葡萄糖，摩尔比为5:1~2:1。

5.根据权利要求3所述的海洋盐单胞菌胞外多糖的应用，其特征在于：以EPS2E1为活性成分，与药学上可接受的辅料或辅助添加剂成分混合后，用来制备具有免疫增强作用的药物或药物组合物。