[发明专利]液质联用快速测定尿液或细胞培养基中稻曲菌素A含量的方法

权利要求书

1.一种尿液或细胞培养基中稻曲菌素A的液质联用检测方法，包括下述步骤：

(1)样品预处理：

(a)量取尿液或细胞培养基样本，加入等体积二氯甲烷溶液涡旋，高速离心，保留上清液待净化；

(b)用含体积分数为0.5％的甲酸的0.2M乙酸铵溶液稀释步骤(a)的待净化液，待净化液与乙酸铵溶液的体积比为1:1～1:5，稀释后的待净化液通过提前活化的HLB小柱，小柱用2mL含体积分数为0.5％甲酸的0.2M乙酸铵溶液淋洗一次，弃去淋洗液；真空泵抽干；然后采用2-4mL 30％甲醇-水溶液洗脱，收集洗脱液；

HLB柱活化条件为：依次量取1-4mL甲醇、1-4mL含有0.5％甲酸的0.2M乙酸铵溶液缓冲液通过HLB柱；

(c)将步骤(b)所得的待净化液用氨水溶液调节pH至4-6并通过提前活化的WAX柱，并依次采用1-4mL pH＝4-6甲酸溶液、1-4mL甲醇溶液、1-4mL含体积分数为0.2％甲酸的甲醇溶液淋洗小柱，弃去淋洗液，真空泵抽干；最后用1-4mL 1％的氨化甲醇溶液洗脱；所得洗脱液氮气吹干后用0-10％甲醇-水溶液复溶，高速离心，将上清液转移至内插管中用于LC-MS/MS检测；

WAX活化条件为：依次量取2-4mL甲醇、2-4mL pH＝4-6甲酸水溶液通过WAX柱；(2)LC-MS/MS测定样品中稻曲菌素的含量：

液相色谱采用ACQUITY UPLC HSS T3柱，为2.1mm×100mm,1.8μm色谱柱，流动相A为甲醇，流动相B为0.01％-0.1％甲酸水；柱温为30-45℃；进样体积为1-5μL；流速为0.2-0.45mL/min；运行梯度为0min,5％A；0.5min,5％A；7min,40％A；9min,98％A；12min,98％A；12.2min,5％A；15min,5％A；

LC-MS/MS检测条件为：Waters ACQUITYH-Plus超高效液相色谱串联TQ-XS三重四级杆质谱进行检测；其中，质谱采用电喷雾离子源，多反应监测模式检测扫描目标分析物；

质谱条件：离子源为ESI+，毛细管电压为1.0KV，脱溶剂温度为300℃，脱溶剂流速和碰撞气流速分别为600和150L/h；检测稻曲菌素A的质谱参数为：

以上所述的方法中，所述的HLB柱的品牌，型号为waters,60mg，3CC；WAX柱购自安谱，CNW,200mg,3CC。