[发明专利]一种血参叶片组培与快繁体系的建立方法

说明书

本发明公开了一种血参叶片组培与快繁体系的建立方法，包括如下步骤：S1：将血参外植体叶片灭菌处理；S2：血参叶片愈伤组织诱导；S3：血参叶片愈伤组织增殖培养；S4：血参叶片愈伤组织芽分化；S5：生根培养；S6：血参组培苗移栽。采用本发明所述方法建立了血参快速繁殖体系，以血参叶片为外植体，血参叶片诱导率达87％，增殖系数达4.6，组培苗移栽成活率达95％，此方法提高能够为血参转基因与遗传改良提供技术支持；也为血参商业化生产及药用价值开发提供重要基础。

技术领域

本发明属于中药植物组培技术领域，尤其涉及一种血参叶片组培与快繁体系的建立方法。

背景技术

血参又名丹参、紫丹参，为唇形科鼠尾草属植物，其干燥根及根茎具有极高的药用价值，首载于《神农本草经》，具有活血化瘀、止痛、养血安神等功效。世界各国将血参作为药品或食品，其在添脉供血、消炎、抑菌、抗氧化及抗肿瘤等方面都具有一定疗效。

近年来，血参的需求量不断增长，传统育种已不能满足市场需求。传统育种周期长且繁殖系数低，通过运用组织培养技术在短时间内增高繁殖系数，有利于血参优良品种高效进行商业化生产。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

针对上述现有技术存在的不足，本发明提供一种血参叶片组培与快繁体系的建立方法，建立血参叶片无菌快繁体系。

为了实现上述目的，本发明提供的一种血参叶片组培与快繁体系的建立方法，包括以下步骤：

S1：选取平均长度为3cm、宽度为2cm的血参叶片作为外植体，首先将血参叶片用75％乙醇浸泡10s，然后用double distilled H2O冲洗3次，再用2％的NaClO消毒液浸泡8min，最后用double distilled H2O冲洗4～5次，获得无菌血参叶片；

S2：所述步骤S1获得的无菌血参叶片用无菌手术刀切分若干份，接种到PH值为5.8的MS诱导培养基中，在培养温度为25±1℃的条件下暗培养14d，被切分的血参叶片形成愈伤组织；

S3：将所述步骤S2得到的无菌血参叶片移植到PH值为5.8的MS增殖培养基中，在光照强度阈值为4800～6000lx，光照培养16h/d的条件下培养20d；

S4：将所述步骤S3的无菌血参叶片移植到PH值为5.8的芽分化培养基中，在光照强度阈值为4800～6000lx，光照培养16h/d的条件下培养诱导出芽；

S5：将所述步骤S4的无菌血参叶片用无菌刀切分为单株，移植到PH值为5.8的生根培养基中，在培养温度为25±1℃，光照培养16h/d的条件下培养30d；

S6，将所述步骤S5得到的血参生根苗移栽至装有营养基质土的花盆中，温室温度为25℃。

优选地，所述MS诱导培养基为MS基本培养基中添加3g/L琼脂、30g/L蔗糖、4.43g/LMS、2mg/L 6-BA和0.1mg/L NAA；

优选地，所述MS增殖培养基为MS基本培养基中添加3g/L琼脂、30g/L蔗糖、4.43g/LMS、2mg/L 6-BA和0.5mg/L NAA；

优选地，所述芽分化培养基为MS基本培养基中添加3g/L琼脂、30g/L蔗糖、4.43g/LMS、0.5mg/L 6-BA和0.1mg/L NAA；

优选地，所述生根培养基为MS基本培养基中添加3.5g/L琼脂、15g/L蔗糖和2.215g/L MS；

优选地，所述营养基质土包括基质土、蛭石和珍珠岩，其配比为基质土∶蛭石∶珍珠岩为3∶1∶1。

本发明提供的一种血参叶片组培与快繁体系的建立方法，具有如下有益效果：