[发明专利]一种毛发中甲基苯丙胺类毒品的检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种毛发中甲基苯丙胺类毒品的检测试剂盒，其特征在于：包括提取液、包被有鼠抗甲基苯丙胺单克隆抗体的酶标板，检测抗体以及酶标二抗，所述检测抗体为兔抗甲基苯丙胺多克隆抗体，所述酶标二抗为山羊抗兔IgG-HRP。

2.根据权利要求1所述的毛发中甲基苯丙胺类毒品的检测试剂盒，其特征在于：所述提取液包括裂解液，所述裂解液由浓度为1mol/L的NaOH溶液和质量浓度为10％的SDS溶液组成。

3.根据权利要求2所述的毛发中甲基苯丙胺类毒品的检测试剂盒，其特征在于：所述提取液还包含中和液，所述中和液为pH值为9.6的醋酸-醋酸钠缓冲溶液。

4.根据权利要求1所述的毛发中甲基苯丙胺类毒品的检测试剂盒，其特征在于：所述包被有鼠抗甲基苯丙胺单克隆抗体的酶标板中，鼠抗甲基苯丙胺单克隆抗体的浓度为20μg/mL。

5.根据权利要求1所述的毛发中甲基苯丙胺类毒品的检测试剂盒，其特征在于：所述检测抗体为1:1000稀释的兔抗甲基苯丙胺多克隆抗体，所述酶标二抗为1:5000稀释的山羊抗兔IgG-HRP。

6.一种毛发中甲基苯丙胺类毒品的检测方法，其特征在于：使用如权利要求1-5任一项所述的毛发中甲基苯丙胺类毒品的检测试剂盒进行检测，所述检测方法包括以下步骤：

S1、将毛发剪成小段后，置于容器中，利用所述提取液进行毒品提取，获得待测提取液；

S2、利用双抗体夹心ELISA法检测待测提取液中的毒品含量，其包括以下步骤：

S21、在包被有鼠抗甲基苯丙胺单克隆抗体的酶标板中，分别按100μL/孔加入待测提取液和标准品溶液，37℃恒温孵育1.5h，用PBST溶液洗涤3次，每次3min；所述标准品溶液用于绘制标准曲线，所述标准品溶液的浓度分别为：700ng/mL、350ng/mL、175ng/mL、87.5ng/mL、43.75ng/mL、21.88ng/mL、10.94ng/mL；

S22、将经1:1000稀释的兔抗甲基苯丙胺多克隆抗体加入到经步骤S21处理后的酶标板的孔中，每孔加入100μL，37℃恒温孵育1h，用PBST溶液洗涤3次，每次3min；

S23、将经1:5000稀释的山羊抗兔IgG-HRP加入到经步骤S22处理后的酶标板的孔中，每孔加入100μL，37℃恒温孵育0.5h，用PBST溶液洗涤4次，每次3min；

S24、在经步骤23处理后的酶标板的孔中，每孔加入100μL底物显色液，恒温孵育15min-20min，再加入50μL的Elisa终止液终止反应，30分钟内在450nm处测定吸光值。

7.根据权利要求6所述的毛发中甲基苯丙胺类毒品的检测方法，其特征在于：步骤S1中，获得待测提取液的方法为：取50mg待检测毛发，用70％的乙醇擦洗1-3遍后用剪刀将毛发剪成0.5cm-1cm的大小，转移到离心管中，加入500μL裂解液，75℃孵育10min，取300μL裂解后的产物转移到新的离心管中加入200μL中和液，室温静至1min，12000rpm离心5min，吸取上清液即得所述待测提取液；所述裂解液由浓度为1mol/L的NaOH溶液和质量浓度为10％的SDS溶液混合形成；所述中和液为pH值为9.6的醋酸-醋酸钠缓冲溶液。

8.根据权利要求6所述的毛发中甲基苯丙胺类毒品的检测方法，其特征在于：步骤S21中，包被有鼠抗甲基苯丙胺单克隆抗体的酶标板的制备过程包括以下步骤：

S211、用碳酸盐包被缓冲液溶解鼠抗甲基苯丙胺单克隆抗体，使所述鼠抗甲基苯丙胺单克隆抗体的终浓度为20μg/mL，按100μL/孔加入到酶标板中，4℃放置过夜；

S212、隔天弃去包被液后，用PBST溶液洗涤3次，每次3min。

9.根据权利要求8所述的毛发中甲基苯丙胺类毒品的检测方法，其特征在于：步骤S211中，所述碳酸盐包被缓冲液的浓度为50mmol/L，pH值为9.6。

10.根据权利要求6所述的毛发中甲基苯丙胺类毒品的检测方法，其特征在于：步骤S24中，所述底物显色液为双组分TMB显色液。