[发明专利]一种检测miRNA的方法及一种用于检测miRNA的生物探针

权利要求书

1.一种检测miRNA的方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)制备PEG修饰的AuNPs，得AuNPs-PEG；

(2)根据待测miRNA的序列合成与之序列完全配对的DNA片段，所述DNA片段5’端连接有亲和素，3’端依次连接含有3-10个碱基序列及linker、-SH，形成目标miRNA的DNA探针，linker含有至少一个亚甲基；

(3)将上述步骤中的DNA探针与AuNPs-PEG反应，得PEG-AuNPs-DNA probe；

(4)将含有或不含有目标miRNA的样本、DSNbuffer、DSN、RNase抑制剂、PEG-AuNPs-DNAprobe进行反应；

(5)终止反应，向反应系统中加入链霉亲和素包被的磁性颗粒，进行磁分离，收集磁分离后的溶液，定量检测AuNPs的含量。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)中，AuNPs采用柠檬酸钠还原法制备；AuNPs-PEG的制备方法为：硅基材料经羟基活化、氨基化之后，与AuNPs溶液反应，去除未结合的AuNPs，与HS-PEG-COOH溶液反应，去除多余的HS-PEG-COOH，超声洗涤，即得AuNPs-PEG。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(2)中，3’端连接5个相同的碱基序列，linker为3～6个亚甲基。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(4)中，针对以下反应体系：总反应体积100μL:10nM PEG-AuNPs-DNA，1xDSN buffer，4U RNAase抑制剂，10pM目标miRNA，0.4U DSN，反应体系的温度为45～55℃，DSN浓度为0.4～0.5U，反应时间为80～100min，链霉亲和素磁珠体积为10～20μL。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(5)中，采用ICP-MS方法检测。

6.一种用于检测目标miRNA的生物探针，其特征在于：其包括如下结构：

(1)一段DNA片段，其能与目标miRNA的序列完全配对；

(2)与上述DNA片段一端相连的亲和素，

(3)与上述DNA片段另一端依次相连的3-10个碱基序列及与其相连的linker、-SH片段，linker含有至少一个亚甲基；

(4)与-SH相连的AuNPs。

7.如权利要求6所述的生物探针，其特征在于：亲和素连接在DNA片段的5’端，3-10个碱基序列、linker、-SH片段依次连接在DNA片段的3’端，linker为3-6个亚甲基。

8.如权利要求6-7所述的探针，其特征在于：AuNPs上有PEG修饰。

9.如权利要求6-8所述的生物探针在检测生物样本中目标miRNA的应用。

10.一种用于检测MiR-155的生物探针，其特征在于：其包括如下结构：

(1)5’-SEQ NO.1-3’-linker-SH，所述linker为3-6个亚甲基；

(2)与-SH相连的AuNPs。