[发明专利]一种用于检测新型冠状病毒SARS-CoV2的引物对、反应冻干管及试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于检测新型冠状病毒SARS‑CoV2的引物对、反应冻干管及试剂盒，本发明首次设计了用于检测的新的引物对，经验证能够应用于新型冠状病毒SARS‑CoV2的检测。在新设计的引物对的基础上，本发明进一步设计了反应冻干管，通过将反应所需的所有试剂进行冷冻干燥，实现了产品的常温运输，降低了运输成本和储藏成本。同时，使用的石蜡即解决了指示剂冷冻干燥后变质的问题，又解决了气溶胶污染的问题。本发明基于上述反应冻干管制备成的新型冠状病毒SARS‑CoV2现场检测试剂盒中还包括：核酸释放剂、反应缓冲液、阳性对照品和阴性对照品，核酸释放剂能够高效裂解病毒并释放核酸，对LAMP反应无抑制作用，避免了繁琐的核酸提取过程，提高了新型冠状病毒SARS‑CoV2的检测效率。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，涉及一种用于检测新型冠状病毒SARS-CoV2的引物对、反应冻干管及试剂盒。

背景技术

冠状病毒是一个大型病毒家族，可引起感冒、中东呼吸综合征(MERS)和严重急性呼吸综合征(SARS)等较严重疾病。新型冠状病毒SARS-CoV2是一种以前从未在人体中发现的冠状病毒新毒株，因2019年年底病毒性肺炎病例而被发现，2020年2月12日被世界卫生组织命名为SARS-CoV2。SARS-CoV2具有传染性强、潜伏期长、无症状感染者也可以传染他人等特点。

目前，关于SARS-CoV2的检测相关试剂盒所采用的技术多为RT-PCR技术和免疫胶体金技术，RT-PCR存在操作复杂，对设备依赖性高、检测通量低等不足；而免疫胶体金技术则的特异性和灵敏度均相对较低。

环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification，LAMP)是2000年由日本学者Notomi发明的一种核酸体外恒温扩增技术。其特点是针对靶基因的8个区域设计6种特异性引物，在链置换DNA聚合酶(Bst DNA polymerase)的作用下，60-65℃恒温扩增，15-60分钟左右即可实现10⁹-10¹⁰倍的核酸扩增。具有灵敏度高、特异性强、反应时间短、操作简单、结果易于判读等特点。

当前，中国博奥生物公司推出的六项呼吸道病毒核酸检测试剂盒(恒温扩增芯片法)是目前少数采用恒温扩增技术检测SARS-CoV2的产品，但是该产品仍然需要配备相应的设备进行检测，且检测前需要进行病毒RNA的提取，很难做到真正意义上的现场检测。

发明内容

为了克服上述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种用于检测新型冠状病毒SARS-CoV2的引物对、反应冻干管及试剂盒。

为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案予以实现：

本发明公开了一种用于检测新型冠状病毒SARS-CoV2的引物对，所述引物对为针对orf1ab基因的引物对、针对E基因的引物对或者针对N基因的引物对；

所述针对orf1ab基因的引物对，包括：

F3-Orf1ab：核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示；

B3-Orf1ab：核苷酸序列如SEQ.ID.NO.2所示；

FIP-Orf1ab：核苷酸序列如SEQ.ID.NO.3所示；

BIP-Orf1ab：核苷酸序列如SEQ.ID.NO.4所示；

LF-Orf1ab：核苷酸序列如SEQ.ID.NO.5所示；

LB-Orf1ab：核苷酸序列如SEQ.ID.NO.6所示；

所述针对E基因的引物对，包括：

F3-E：核苷酸序列如SEQ.ID.NO.7所示；

B3-E：核苷酸序列如SEQ.ID.NO.8所示；